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胞内酶不能用超声破碎怎么办？
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大家好： 最近做实验遇到一个问题，就是我重组的蛋白属于胞内酶，但最近诱导破碎菌体再跑SDS-PAGE蛋白胶发现，没有目的蛋白，而用诱导后的菌液直接上样的则有目的条带，难道我这个酶太容易变性？破碎完一经离心，变性的蛋白随之沉底，而留下上样的上清则没有东西？ 我用的是T7表达载体，不知道和这种现象有没有关联？不知大家有没有遇到过这种情况啊？急求解答！谢谢 备注：破碎条件我采用的是P=50%，破2秒，停5秒，总时间1分钟时拿出冷却。还有一点是我的蛋白的诱导表达量不是很高，因为还未经诱导条件的优化。使用IPTG诱导的，宿舍菌为BL21. |
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10楼2012-03-02 09:28:21