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purple~sky铜虫 (小有名气)
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[求助]
第一次提DNA，急求方法：油菜DNA，用于PCR~~谢各位大侠
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| 各位高手大侠们，小女子由于跨专业，所以很多基础实验都不甚明了，现做实验需要从油菜中提取DNA，希望可以得到各位的指点和帮助…… |
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yixinyuan
木虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 6174.1
- 散金: 7
- 红花: 3
- 帖子: 558
- 在线: 162.7小时
- 虫号: 1151599
- 注册: 2010-11-20
- 专业: 生物大分子结构与功能
7楼2012-03-01 20:50:41
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 欢迎常来本版啊，呵呵 2012-02-29 10:04:29
小丹木木(金币+2): 欢迎常来本版啊，呵呵 2012-02-29 10:04:29
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油菜估计不算难提的植物吧？虽然提过很多植物，由于没法采到一直没机会呢。 鉴于你是第一次提，就自己配点试剂手提法练练手看是一个什么结果。 一般流程： 1、样品裂解 液氮研磨油菜成粉末状，然后转移至含裂解液（含RNase）离心管中，充分混匀。65度水浴30-60min，期间混匀数次。 2、除杂 加酚/氯仿抽提去除杂质。离心取上清。 3、沉淀 加入乙醇或异丙醇沉淀DNA。离心沉淀下来用70%乙醇洗涤两次干燥后加入TE溶解即可。 ps:裂解液一般百度或查一下文献即有，可以尝试CTAB的。 以上方法有毒，如果经费允许也可以直接买个试剂盒提。简单省事，但学到的东西肯定不如自己手提。 |
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purple~sky
2楼2012-02-29 09:50:04
purple~sky
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 帖子: 63
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- 虫号: 1032637
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- 性别: MM
- 专业: 作物分子育种
3楼2012-02-29 09:57:54
【答案】应助回帖
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wanhscn(金币+3, 专家考核): 热心应助，加入专家考核！ 2012-02-29 13:53:34
purple~sky: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-04-01 19:53:50
wanhscn(金币+3, 专家考核): 热心应助，加入专家考核！ 2012-02-29 13:53:34
purple~sky: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-04-01 19:53:50
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新鲜的油菜： 小提：研磨你可以多研一些，转移粉末可以用100mg，加入600-700ul左右裂解液。（我的做法是：使用2ml离心管，加入600ul裂解液后放置于电子天平上，然后用小药勺小心拨取样品于管内。不用很精确，约100mg即可） 水浴裂解后可以稍为离心一下去除渣子，取上清后加入等体积的酚氯仿抽提，然后离心取上清，再加入等体积的异丙醇。 ps：你用来做PCR的话小提应该也够了，油菜也不像DNA产量少的样品，100mg应该可以提个10来ug的DNA |
4楼2012-02-29 10:09:58