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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物琼脂糖凝胶电泳检测部分泳道到出现月牙状带型，求解？
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simon江

新虫 (小有名气)

[求助] pcr产物琼脂糖凝胶电泳检测部分泳道到出现月牙状带型，求解？

pcr产物琼脂糖凝胶电泳检测部泳道到出现月牙状带型，注明：这八个泳道的产物同时扩增，只是DNA模板不同。求解


[ Last edited by simon江 on 2012-2-29 at 01:05 ]
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1楼2012-02-29 00:59:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shengxuejs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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电压过大，电流过大，出现了边界效应，使得DNA在泳动过程中的速率不均匀。

lz可以尝试：
1，微波炉制胶时用中火煮沸三次，一沸既止，摇匀再煮沸。
2. 适当减少电压与电泳时间。
3. 点样过程速度加快，避免弥散。

注意以上三点，应该能使得目前的状况得到改善。
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学无止尽，沧海扁舟。
18楼2012-03-13 10:40:02
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bst5

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两点原因
第一：胶没有混匀
第二：梳子没有拔好，建议先把胶倒上，再插梳子
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7楼2012-02-29 14:46:02
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xiayongxiu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我有时候跑胶也会跑的很差，师兄说要做一块好胶，首先得让琼脂糖充分溶解，可以多加会儿热，摇匀后在加热，直到溶液澄清没有颗粒状为止；还有就是电压可能太大。你可以重做一块胶试试，换上新的电泳缓冲液。
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一切都要靠自己努力
8楼2012-02-29 15:21:00
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gaolijuan913

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

要经常用紫外灯看看，别跑过了，一般20分钟左右就跑开了
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nothing
17楼2012-03-01 12:39:45
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2012-02-29 18:02:25
月牙形集中在胶的下部，跑着跑着就弥散了，是不是跑的时间太长了捏？注意电流不要太大，缓冲液刚刚没过胶最好了
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2楼2012-02-29 09:20:37
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cgspider

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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我们经常叫 牛角 状，是因为电压太大了。。
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你的能力撑不起你的野心
15楼2012-03-01 10:33:56
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gaolijuan913

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1%的胶，10v/cm，上样5ul，你试试。这是我跑胶用的条件，几乎没见过月牙，祝你成功
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nothing
16楼2012-03-01 12:38:14
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普通回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2012-02-29 18:02:31
楼上的点样孔应该是在底部吧？
怎么这么多条带？条带范围从多少到多少？你胶浓度是多大？
月牙状也没不是没见过，但挺奇怪的是你同一泳道上有些是月牙有些很正常。难道跟上样量有关？
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伟大航线....
3楼2012-02-29 09:40:03
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vickie20

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
电压或者电流太小？如果是太大应该是微笑型……
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4楼2012-02-29 10:22:25
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eagle00768

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by longrna at 2012-02-29 09:40:03:
楼上的点样孔应该是在底部吧？
怎么这么多条带？条带范围从多少到多少？你胶浓度是多大？
月牙状也没不是没见过，但挺奇怪的是你同一泳道上有些是月牙有些很正常。难道跟上样量有关？

同一泳道上有的正常，有的月牙，是不是因为正常的条带浓度低，月牙状的浓度较高，我觉得应该是电压大的原因
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5楼2012-02-29 13:36:34
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longrna

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by eagle00768 at 2012-02-29 13:36:34:
同一泳道上有的正常，有的月牙，是不是因为正常的条带浓度低，月牙状的浓度较高，我觉得应该是电压大的原因

有道理。
其实电泳不难，多看看参考marker公司跑marker的条件就可以了，关键要细心。
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伟大航线....
6楼2012-02-29 14:11:27
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simon江

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-02-29 09:20:37:
月牙形集中在胶的下部，跑着跑着就弥散了，是不是跑的时间太长了捏？注意电流不要太大，缓冲液刚刚没过胶最好了

电泳条件：5v/CM,电泳时间：4.5小时
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9楼2012-02-29 15:49:21
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simon江

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by longrna at 2012-02-29 09:40:03:
楼上的点样孔应该是在底部吧？
怎么这么多条带？条带范围从多少到多少？你胶浓度是多大？
月牙状也没不是没见过，但挺奇怪的是你同一泳道上有些是月牙有些很正常。难道跟上样量有关？

是的，点样孔在底部，这个是用sts标记的，胶是2%的，上样量6.5ul，整个pcr体系是20ul
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10楼2012-02-29 15:50:51
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