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overlap PCR之问题
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| 各位，我最近在连基因A（700bp左右）和基因B（700bp左右），重叠的连个引物为48bp，连个基因各占24bp。当做重叠PCR时，在1400bp处有条带（在我用的marker-D 1000bp和2000bp间的条带）当然也有其他的杂带。我将此1400bp的带回收后，以此为模板，用头尾引物扩增，每次都是1400bp处条带很暗，而在700bp处条带很亮。我用回收的1400bp做模板时，分别扩基因A和基因B却又能扩出来很明显的A和B，这不是证明了我回收的1400bp为连接上的基因吗 ，可为什么用头尾引物扩1400本身却扩不出来呢？ |
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3楼2012-02-27 19:57:18
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1 ATGGTCAGCT ACTGGGACAC CGGGGTCCTG CTGTGCGCGC TGCTCAGCTG TCTGCTTCTC ACAGGATCTA GTTCAGGTAG TGATACAGGT AGACCTTTCG TACCAGTCGA TGACCCTGTG GCCCCAGGAC GACACGCGCG ACGAGTCGAC AGACGAAGAG TGTCCTAGAT CAAGTCCATC ACTATGTCCA TCTGGAAAGC 101 TAGAGATGTA CAGTGAAATC CCCGAAATTA TACACATGAC TGAAGGAAGG GAGCTCGTCA TTCCCTGCCG GGTTACGTCA CCTAACATCA CTGTTACTTT ATCTCTACAT GTCACTTTAG GGGCTTTAAT ATGTGTACTG ACTTCCTTCC CTCGAGCAGT AAGGGACGGC CCAATGCAGT GGATTGTAGT GACAATGAAA 201 AAAAAAGTTT CCACTTGACA CTTTGATCCC TGATGGAAAA CGCATAATCT GGGACAGTAG AAAGGGCTTC ATCATATCAA ATGCAACGTA CAAAGAAATA TTTTTTCAAA GGTGAACTGT GAAACTAGGG ACTACCTTTT GCGTATTAGA CCCTGTCATC TTTCCCGAAG TAGTATAGTT TACGTTGCAT GTTTCTTTAT 301 GGGCTTCTGA CCTGTGAAGC AACAGTCAAT GGGCATTTGT ATAAGACAAA CTATCTCACA CATCGACAAA CCAATACAAT CATAGATGTG GTTCTGAGTC CCCGAAGACT GGACACTTCG TTGTCAGTTA CCCGTAAACA TATTCTGTTT GATAGAGTGT GTAGCTGTTT GGTTATGTTA GTATCTACAC CAAGACTCAG 401 CGTCTCATGG AATTGAACTA TCTGTTGGAG AAAAGCTTGT CTTAAATTGT ACAGCAAGAA CTGAACTAAA TGTGGGGATT GACTTCAACT GGGAATACCC GCAGAGTACC TTAACTTGAT AGACAACCTC TTTTCGAACA GAATTTAACA TGTCGTTCTT GACTTGATTT ACACCCCTAA CTGAAGTTGA CCCTTATGGG 501 TTCTTCGAAG CATCAGCATA AGAAACTTGT AAACCGAGAC CTAAAAACCC AGTCTGGGAG TGAGATGAAG AAATTTTTGA GCACCTTAAC TATAGATGGT AAGAAGCTTC GTAGTCGTAT TCTTTGAACA TTTGGCTCTG GATTTTTGGG TCAGACCCTC ACTCTACTTC TTTAAAAACT CGTGGAATTG ATATCTACCA 601 GTAACCCGGA GTGACCAAGG ATTGTACACC TGTGCAGCAT CCAGTGGGCT GATGACCAAG AAGAACAGCA CATTTGTCAG GGTCCATGAA AAA CATTGGGCCT CACTGGTTCC TAACATGTGG ACACGTCGTA GGTCACCCGA CTACTGGTTC TTCTTGTCGT GTAAACAGTC CCAGGTACTT TTT 基因A 1 GACAAAACTC ACACATGCCC ACCGTGCCCA GCACCTGAAC TCCTGGGGGG ACCGTCAGTC TTCCTCTTCC CCCCAAAACC CAAGGACACC CTCATGATCT CTGTTTTGAG TGTGTACGGG TGGCACGGGT CGTGGACTTG AGGACCCCCC TGGCAGTCAG AAGGAGAAGG GGGGTTTTGG GTTCCTGTGG GAGTACTAGA 101 CCCGGACCCC TGAGGTCACA TGCGTGGTGG TGGACGTGAG CCACGAAGAC CCTGAGGTCA AGTTCAACTG GTACGTGGAC GGCGTGGAGG TGCATAATGC GGGCCTGGGG ACTCCAGTGT ACGCACCACC ACCTGCACTC GGTGCTTCTG GGACTCCAGT TCAAGTTGAC CATGCACCTG CCGCACCTCC ACGTATTACG 201 CAAGACAAAG CCGCGGGAGG AGCAGTACAA CAGCACGTAC CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTCCTGCAC CAGGACTGGC TGAATGGCAA GGAGTACAAG GTTCTGTTTC GGCGCCCTCC TCGTCATGTT GTCGTGCATG GCACACCAGT CGCAGGAGTG GCAGGACGTG GTCCTGACCG ACTTACCGTT CCTCATGTTC 301 TGCAAGGTCT CCAACAAAGC CCTCCCAGCC CCCATCGAGA AAACCATCTC CAAAGCCAAA GGGCAGCCCC GAGAACCACA GGTGTACACC CTGCCCCCAT ACGTTCCAGA GGTTGTTTCG GGAGGGTCGG GGGTAGCTCT TTTGGTAGAG GTTTCGGTTT CCCGTCGGGG CTCTTGGTGT CCACATGTGG GACGGGGGTA 401 CCCGGGATGA GCTGACCAAG AACCAGGTCA GCCTGACCTG CCTGGTCAAA GGCTTCTATC CCAGCGACAT CGCCGTGGAG TGGGAGAGCA ATGGGCAGCC GGGCCCTACT CGACTGGTTC TTGGTCCAGT CGGACTGGAC GGACCAGTTT CCGAAGATAG GGTCGCTGTA GCGGCACCTC ACCCTCTCGT TACCCGTCGG 501 GGAGAACAAC TACAAGACCA CGCCTCCCGT GCTGGACTCC GACGGCTCCT TCTTCCTCTA CAGCAAGCTC ACCGTGGACA AGAGCAGGTG GCAGCAGGGG CCTCTTGTTG ATGTTCTGGT GCGGAGGGCA CGACCTGAGG CTGCCGAGGA AGAAGGAGAT GTCGTTCGAG TGGCACCTGT TCTCGTCCAC CGTCGTCCCC 601 AACGTCTTCT CATGCTCCGT GATGCATGAG GCTCTGCACA ACCACTACAC GCAGAAGAGC CTCTCCCTGT CTCCGGGTAA ATGA TTGCAGAAGA GTACGAGGCA CTACGTACTC CGAGACGTGT TGGTGATGTG CGTCTTCTCG GAGAGGGACA GAGGCCCATT TACT 基因B P1：5'GCTCTAGAATGGTCAGCTACTGGGACAC3' P2：5'GGTGGGCATGTGTGAGTTTTGTCTTTTTCATGGACCCTGACAAATGTG3' P3：5'CACATTTGTCAGGGTCCATGAAAAAGACAAAACTCACACATGCCCACC3' p4:5'GAGAATTCTCATTTACCCGGAGACAGGG3' |
2楼2012-02-27 19:56:30
4楼2012-02-28 09:14:14
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