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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 天然生物材料 » 提高DNA连接效率操作问题
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水墨丹青

木虫 (小有名气)

[求助] 提高DNA连接效率操作问题

之前做过ＤＮＡ的连接，用的是ＥＤＣ－ＮＨＳ体系，但是老是接不上去。所以想想各位请教请教~
我用的ＥＤＣ和ＮＨＳ的水溶液体系。体系的ＰＨ没有特意调，先加的ＥＤＣ，15min活化后加的ＮＨＳ，但是接完后计算连接效率才发现完全没有接上去，不知道各位能不能帮忙找找有什么问题。
如果有其他的高效率连接ＤＮＡ的连接方法，也还请大家多多指教。
以上~~
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1楼 2012-02-22 11:34:33
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hcswj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
水墨丹青(金币+2): ★有帮助 诶~实验，就是这么纠结啊。。。 2012-03-01 14:46:24
markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2012-03-20 17:44:40
我曾经用氨基DNA接羧基磁珠，也是死都接不上去，不管是自己合成修饰的磁珠还是买的磁珠都不行。后来我用羧基DNA接氨基磁珠就接上去了，至今没找到原因。
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启程
9楼2012-02-26 21:31:05
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普通回帖

772968930

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
水墨丹青(金币+2): ★有帮助 呵呵。。好啊~posuidezhi@gmail.com或者1097429205@qq.com，还请你发到我的邮箱咯~~谢谢啦！ 2012-02-25 00:35:02
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2012-02-25 08:54:02
我也在感叹啊，文献上的不可信啊
不过我可以给你点文献，你试一试
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一心向着太阳
2楼2012-02-22 12:44:31
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hcswj

木虫 (小有名气)
你的DNA带什么基团？连接到什么基质上？
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启程
3楼2012-02-23 10:30:57
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hcswj

木虫 (小有名气)
还有你用的什么方法验证没有接上？
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启程
4楼2012-02-23 10:35:36
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水墨丹青

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by hcswj at 2012-02-23 10:30:57:
你的DNA带什么基团？连接到什么基质上？

DNA上面接FAM啊~不过这个跟binding有什么关系呢？
接到类似于介孔硅的表面~~
你有什么建议不？
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5楼2012-02-25 00:36:40
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水墨丹青

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by hcswj at 2012-02-23 10:35:36:
还有你用的什么方法验证没有接上？

我的DNA上面是有FAM基团的，如果接上了或有荧光效应，但是我洗干净之后测荧光完全没有响应。。。
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6楼2012-02-25 00:37:35
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hcswj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
水墨丹青(金币+1): ★有帮助 带羧基，确定是羧基表面。所以需要羧基+氨基的好的连接方法~ 2012-02-25 12:55:23
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2012-02-26 22:19:59
你的介孔硅上面带羧基还是氨基？如果这个是你自己合成的，有没有表征过其表面基团？
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启程
7楼2012-02-25 10:27:11
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水墨丹青

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by hcswj at 2012-02-25 10:27:11:
你的介孔硅上面带羧基还是氨基？如果这个是你自己合成的，有没有表征过其表面基团？

带羧基。是我自己合成的，表征之后确定其表面基团就是-COOH。
但是现在的问题是我确定我的介孔硅上面是羧基，DNA上面是氨基，用EDC-NHS体系就是接不上去~发愁啊！
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8楼2012-02-26 09:06:34
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liuhaiyun

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2012-03-14 21:05:07
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