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panpan3209

金虫 (小有名气)

[求助] 抗体非特异性结合

类似ELISA法，通过二抗与抗体的结合检测溶液中物质，二抗吸附于NC膜上。但发现抗体与另一谱带的亲和素类蛋白物质发生非特异性结合，溶液中BSA、吐温均含少量，但非特异性结合仍存在。请问各位大侠，如何能减弱其非特异性结合？最好是在不影响特异性目的结合的条件下。因还需给出较好的检测信号值。
非常感谢！！！

[ Last edited by panpan3209 on 2012-2-22 at 09:36 ]
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1楼 2012-02-22 09:06:13
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
panpan3209(金币+2): 2012-02-22 10:48:25
可以先加入一种可以和亲和素类蛋白物质结合但是不和二抗作用的物质，以中和亲和素类蛋白物质。然后再加入抗体检测就可以了，这时候由于亲和素类蛋白物质已经和前面加得物质结合了，就少量或者不和你的抗体作用了，这样就减少了非特异性扩增
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2楼2012-02-22 10:30:22
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panpan3209

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 若水5886 at 2012-02-22 10:30:22:
可以先加入一种可以和亲和素类蛋白物质结合但是不和二抗作用的物质，以中和亲和素类蛋白物质。然后再加入抗体检测就可以了，这时候由于亲和素类蛋白物质已经和前面加得物质结合了，就少量或者不和你的抗体作用了， ...

溶液中有可以和亲和素类蛋白质结合的物质存在的，可是还是会有抗体与其结合。请问还有什么办法吗？谢谢！
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3楼2012-02-22 10:48:16
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

panpan3209(金币+5): 2012-02-22 13:32:57
如果实在去除不了是不是可以换个角度考虑一下，干脆就不去除非特异性结合了，做隐形对照或者是标准曲线，看看抗体与另一谱带的亲和素类蛋白物质相互作用引起的吸光值变化怎么样，真正检测的时候减去阴性对照的本底值或者是对照标准曲线计算出待测物的浓度
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4楼2012-02-22 12:13:46
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panpan3209

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 若水5886 at 2012-02-22 12:13:46:
如果实在去除不了是不是可以换个角度考虑一下，干脆就不去除非特异性结合了，做隐形对照或者是标准曲线，看看抗体与另一谱带的亲和素类蛋白物质相互作用引起的吸光值变化怎么样，真正检测的时候减去阴性对照的本底 ...

谢谢您。这个办法我也想过，但是就是担心这非特异性结合的不稳定，会随着抗体浓度或者是其他的东西而变化。不过我会好好考虑的，谢谢。
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5楼2012-02-22 13:34:05
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panpan3209

金虫 (小有名气)
6楼2012-02-22 14:55:17
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aquemarine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
panpan3209(金币+3): 2012-02-23 08:49:08
"亲合素又称卵白蛋白或抗生物素，分子量为68000，pI 10～10.5;亲和素的高pI及高含糖结构导致在聚苯乙烯板和硝酸纤维素膜上或与组织细胞DNA结合时，易产生一定程度的非特异性结合，造成较高的显色背景;链霉亲和素等电点更接近中性（pI=5~6），且不含糖基侧链,链亲和素在应用中明显克服了亲和素的这一缺点."
(引自网络)
你用的是亲和素还是链霉亲和素呢?
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守候健康 等待平安归来！
7楼2012-02-22 21:10:34
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panpan3209

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by aquemarine at 2012-02-22 21:10:34:
"亲合素又称卵白蛋白或抗生物素，分子量为68000，pI 10～10.5;亲和素的高pI及高含糖结构导致在聚苯乙烯板和硝酸纤维素膜上或与组织细胞DNA结合时，易产生一定程度的非特异性结合，造成较高的显色背景;链霉亲 ...

谢谢！
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8楼2012-02-23 08:49:01
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guo_ahu

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 若水5886 at 2012-02-22 12:13:46
如果实在去除不了是不是可以换个角度考虑一下，干脆就不去除非特异性结合了，做隐形对照或者是标准曲线，看看抗体与另一谱带的亲和素类蛋白物质相互作用引起的吸光值变化怎么样，真正检测的时候减去阴性对照的本底值 ...

请问不去除非特异性吸附，定量可以吗
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9楼2017-07-22 15:15:02
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