24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

mirror3895

铁杆木虫 (正式写手)

应助: 24 (小学生)
金币: 5173.8
帖子: 860
在线: 258.6小时
虫号: 621408

[交流] 大肠杆菌感受态转化子总是空载体，请高手指点

最近做克隆测序，非常不顺利，很苦恼。简单描述一下：
目的片段1.5kb，使用的是TAKARA pMD19-T载体，载体和PCR产物比例为1:4左右，4度连接过夜，转化DH5a感受态细胞，以control片段做对照，42度热击，复壮后涂amp板子，培养14小时候，平板上有菌落长出来（解释一下：为了省事，没有加x-gal和IPTG），但是在做菌落PCR验证时，阳性克隆很少很少，是怎么回事啊？求各位高手指点一下，谢谢了

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有280人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

大肠杆菌感受态细胞的制备已经有10人回复
如何把质粒转入大肠杆菌中？已经有13人回复
大肠杆菌电转感受态细胞的制备中遇到的问题已经有8人回复
转化遭遇红霉素对大肠杆菌失效！已经有13人回复
SOB培养基与LB培养基做大肠杆菌感受态哪个更好已经有7人回复
克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？已经有17人回复
【求助/交流】大肠杆菌感受态制备及转化中的问题已经有3人回复
【求助/交流】大肠杆菌DH5α感受态细胞制备求助已经有19人回复
【求助/交流】大肠杆菌感受态污染问题已经有21人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:
查看全部散金贴

1楼2012-02-19 11:00:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

mirror3895

铁杆木虫 (正式写手)

应助: 24 (小学生)
金币: 5173.8
帖子: 860
在线: 258.6小时
虫号: 621408

引用回帖:

楼: Originally posted by 小猫三两只 at 2012-02-25 11:05:55:
酒精沉淀：产物（一般为100ul，不足的话加水补充）+1/10体积醋酸钠（3M，PH＝5.2）+2.5体积100%酒精。－80度沉淀30分钟，（－20度也行，时间稍长些）；12000rpm,10min;去上清，75% Eth,12000,10min；去上清，100 ...

PCR产物里一般不会有什么杂质，这样沉淀最重要的是起到什么作用啊？浓缩？