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商新利

木虫 (初入文坛)

[求助] 亚硝化细菌的MPN法测定

有没有用MPN法测定土壤中的亚硝化细菌的数量的啊?我做的是10-4到10-8的稀释度,怎么用格里斯氏试剂检验后都有红色出现啊?有的是立即出现,有的是等20S左右出现,总之都有粉红色出现,这时候该怎么办呢?请做过的各位大侠指点一下,感谢至极啊,在线等,急!!
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wjf008

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先排除偶然因素,比如存不存在器材和药品的污染问题,操作是否规范,然后是梯度稀释,每个梯度必须换移液管。然后就是考虑稀释度够不够,不过-4到-8已经够高了。
2楼2012-02-06 14:49:27
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商新利

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by wjf008 at 2012-02-06 14:49:27:
先排除偶然因素,比如存不存在器材和药品的污染问题,操作是否规范,然后是梯度稀释,每个梯度必须换移液管。然后就是考虑稀释度够不够,不过-4到-8已经够高了。

你以前做过的有什么显色反应吗?是立即变成粉红色吗?我做的是全部变成粉红色,并且只加一液、二液各两滴时间一长也会变红的,不知道怎么操作啊?是药的问题吗?
3楼2012-02-06 16:45:33
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wjf008

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

商新利(金币+2): ★★★很有帮助 2012-02-10 22:30:24
如果怀疑是药品问题可以做空白对照。
4楼2012-02-07 08:59:21
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商新利

木虫 (初入文坛)

谢谢你,不过我想问空白做的就是用无菌水代替菌液还是直接用蒸馏水就可以呢?另外检验时用的滴管和白瓷比色板是不是也需要灭菌处理啊?
5楼2012-02-10 15:35:39
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商新利

木虫 (初入文坛)

zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-02-11 19:43:42
引用回帖:
: Originally posted by wjf008 at 2012-02-07 08:59:21:
如果怀疑是药品问题可以做空白对照。

谢谢你,不过我想问空白做的就是用无菌水代替菌液还是直接用蒸馏水就可以呢?另外检验时用的滴管和白瓷比色板是不是也需要灭菌处理啊?还有,我从资料上看到的格里斯试剂的配药方法稍微不同,分为以下三种:1.一液:0.5g对氨基苯磺酸+150ml20%稀醋酸,二液:1g1-萘胺+20ml蒸馏水(未煮沸)+150ml20%稀醋酸;2.0.5g对氨基苯磺酸+150ml30%稀醋酸,二液:0.5g1-萘胺+50ml蒸馏水(煮沸)+150ml30%稀醋酸;3.一液:0.5g对氨基苯磺酸+稀醋酸(10%左右)150mL
  二液:α萘胺0.1g+蒸馏水20mL+醋酸(10%左右)150 mL。这三种方法的配制对检验有没有影响啊?目前我用的是第一种...
非常感谢你!!!
6楼2012-02-10 22:28:48
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商新利

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by wjf008 at 2012-02-07 08:59:21:
如果怀疑是药品问题可以做空白对照。

您好,我的亚硝化细菌频频出现错误,周围的人又没有做的,不知道您做过没有啊?和您交流一下,我的QQ:510380127,万分感谢啊
7楼2012-02-13 20:39:12
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点点招财猫

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 商新利 at 2012-02-13 20:39:12
您好,我的亚硝化细菌频频出现错误,周围的人又没有做的,不知道您做过没有啊?和您交流一下,我的QQ:510380127,万分感谢啊...

您好!请问你那里有没有亚硝化细菌的分离纯化好的斜面,目前我自己就想出来一个方向,需要用到土壤亚硝化细菌,我的实验的重点不是在这里,所以我想直接买点菌种,直接用于后续的实验,感觉朋友你也是做亚硝化细菌的,不知道能不能卖个斜面给我呢?真的感谢你,现在搞不到菌,我一直耽搁着没法做实验,热锅上的蚂蚁,拜托你!
8楼2013-12-24 15:02:07
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点点招财猫

铜虫 (正式写手)

您好!请问你那里有没有亚硝化细菌的分离纯化好的斜面,目前我自己就想出来一个方向,需要用到土壤亚硝化细菌,我的实验的重点不是在这里,所以我想直接买点菌种,直接用于后续的实验,感觉朋友你也是做亚硝化细菌的,不知道能不能卖个斜面给我呢?真的感谢你,现在搞不到菌,我一直耽搁着没法做实验,热锅上的蚂蚁,拜托你!
9楼2013-12-24 15:02:18
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hijacking

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wjf008 at 2012-02-06 14:49:27
先排除偶然因素,比如存不存在器材和药品的污染问题,操作是否规范,然后是梯度稀释,每个梯度必须换移液管。然后就是考虑稀释度够不够,不过-4到-8已经够高了。

您好!这个问题我也遇到了,梯度够,空白也有,灭菌规范,但确实是显色不明显,即使是新配的显色剂,如果大神在做,还请赐教,因为我觉得硝化、亚硝化的MPN计数,用染色法确实不靠谱。
10楼2014-01-04 23:31:45
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