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zrn_jane木虫 (小有名气)
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测ROS是否需要固定细胞
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| 我在用荧光酶标仪测ROS，为了消除背景荧光，加探针后要洗3遍。用的碧云天的试剂盒，上面说用无血清培养基洗，看了看论坛里面说的，很多人用PBS洗，不知道有什么差别呢？另外，我用的HEK293贴壁不牢，洗3遍后很多细胞会被洗掉，特别是刺激严重的组，死细胞更是被洗掉了。所以导致最后测得control组(没刺激)的荧光强度都要比加药组高很多，但是死细胞多的ROS应该更强才对，这个明显是违背实验结论的呀。后面想到能否加完探针后用4%的多聚甲醛固定细胞，但是发现好像测ROS的没什么这样做的，不知道行不行，请教下各位大侠！另外，好像多聚甲醛是不是不能固定死细胞啊，这样是不是还是有问题啊。苦恼中。。。 |
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