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youngsun50

木虫 (正式写手)

[交流] 基因组文库构建时DNA酶切片段用胶回收吗？

RT，我构建的是细菌的基因组文库，基因组DNA BamHI酶切后显示大多在3K-7K,少数<3K,请问
1）我还用选择性的胶回收某个范围大小的片段吗，因为我也不知道我要的基因在多大片段上？
2）如果不回收的话怎么处理酶切后产物进行连接反应（用pUC19载体），我看有65度5min灭活限制酶的，可行吗？
谢谢，请大侠指点

[ Last edited by youngsun50 on 2012-1-2 at 10:18 ]
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1楼2012-01-01 17:25:09
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1, 专家考核): Good！ 2012-01-03 08:33:15
youngsun50(金币+2): 2012-01-11 17:08:58
引用回帖:
4楼: Originally posted by youngsun50 at 2012-01-02 20:57:01:
但我怕漏掉小片段啊，能用PCR回收试剂盒把所有的片段都回收做连接吗，小片段对连接没影响吧？
另，pUC载体最大能插入多大的片段啊？谢谢

  <10kb, 你需要补充下文库质量评价方面的知识。

有一个概念你需要自己查一下：覆盖度
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5楼2012-01-02 23:17:07
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
youngsun50(金币+1): 2012-01-02 21:08:08
西瓜(金币+1): 老专家，常来啊~ 2012-01-03 08:33:49
文库构建时尽量用较大的片段，切胶回收没商量。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2012-01-02 18:54:44
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quiller2000

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
youngsun50(金币+1): 2012-01-02 21:08:20
西瓜(金币+1): 欢迎常来~ 2012-01-03 08:32:48
你要先调查一下你的基因组中一般情况下基因的大小；一般都要用胶回收！
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2012-01-02 20:10:23
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youngsun50

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by brightfuture01 at 2012-01-02 18:54:44:
文库构建时尽量用较大的片段，切胶回收没商量。

但我怕漏掉小片段啊，能用PCR回收试剂盒把所有的片段都回收做连接吗，小片段对连接没影响吧？
另，pUC载体最大能插入多大的片段啊？谢谢
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4楼2012-01-02 20:57:01
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