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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 血样经沉淀处理，离心后可以直接进LC-MS吗？
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天风海韵

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
karl2100(金币+1): 3Q 2011-12-28 23:55:33
可以涡旋后放4℃冰箱冻半个小时后再离心取上清进样，会比较干净
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11楼2011-12-28 22:53:23
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爱予橙

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 天风海韵 at 2011-12-28 22:53:23:
可以涡旋后放4℃冰箱冻半个小时后再离心取上清进样，会比较干净

这是为什么呢？每次都冻半小时岂不是很费时间的啊？
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12楼2011-12-29 15:06:29
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天风海韵

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 爱予橙 at 2011-12-29 15:06:29:
这是为什么呢？每次都冻半小时岂不是很费时间的啊？

低温下使蛋白沉淀得更完全，上清液干净，不容易堵柱子，时间上样品少样品多都差不多的，你在冻的时候可以继续处理下一批样品吧
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爱予橙
13楼2011-12-29 18:15:53
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爱予橙

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 天风海韵 at 2011-12-29 18:15:53:
低温下使蛋白沉淀得更完全，上清液干净，不容易堵柱子，时间上样品少样品多都差不多的，你在冻的时候可以继续处理下一批样品吧

哦，好的～ 谢谢啊～～
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14楼2011-12-31 11:17:16
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rr.elijar

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 天风海韵 at 2011-12-28 22:53:23
可以涡旋后放4℃冰箱冻半个小时后再离心取上清进样，会比较干净

我想问一下，我们没有半小时放冰箱，一直都是直接进柱子，现在发现柱压越来越高，不知道你们情况如何？
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15楼2012-11-09 18:50:44
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zlfok00

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2013-02-17 22:39:22
具体血浆处理方法要依据各方法的回收率和基质效应大小而定。沉淀剂均采用色谱纯，沉淀后离心一次即可，离心后过针头滤器，之后才可以进样检测，生物样品脏的很，不过滤头不仅对色谱柱不好，质谱系统也是较易污染的，而且清洗起来比较复杂。
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16楼2012-11-09 20:58:57
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staffyujay

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

3倍乙腈5倍甲醇？建议有条件还是液液萃取或者固相萃取柱，沉淀蛋白进样品总感觉伤质谱的很啊
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17楼2013-02-05 16:58:49
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shex

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
karl2100: 金币+1, 多谢提供！ 2013-02-17 22:39:34
处理方法应该可以，我们也是这样做的，更主要的是看回收率怎么高。沉淀和萃取都行，前面都说了。但还有一点可能没注意，你的流动相梯度如何，对样品的溶解度怎么样。按你的方法，最后的样品中相当于甲醇>75%，有机相比例很高，自然样品溶的好，但流动相的初始梯度不大可能真么高，样品成份会在柱头析出，特别是有盐的情况。还有就是高保留的成分是否全部洗脱，若沉积在柱子里也会随着进样柱压越来越高。
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18楼2013-02-17 10:17:08
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yangsophia21

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这么做肯定是可以的，也有很多实验室在用，但肯定是对色谱柱、离子源有一定的影响。
有些方面也是要注意：
1. 沉淀的溶剂和体积比。有篇文献专门研究不同的沉淀剂对血浆蛋白沉淀的效果（你可以上网查查），乙腈是要好过甲醇，而且体积比至少是3:1。4度放置、4度高速离心，也有利于提高沉淀效果。
     色谱柱尽量不要用超高压的，如1.8um，压力会上的很快。我们曾经乙酸乙酯提取的样品，1.8um的柱子的压力很快升上去了。
      尽量使用预柱
      上过血浆直接沉淀样品的色谱柱，切记冲洗时不要用高比例的有机相（如70%以上），会加速柱压上升。（据分析是因为将截留在柱头的蛋白再次变性，相当于第二次蛋白沉淀，形成致密层。
2. 色谱峰的峰形。  当进样的样品中所含的有机相比例，高于流动相中的有机相比例时，色谱峰就会变宽、胖。这点你可以试试，很明显。（当然，你也可以通过设定梯度洗脱来改善峰形）
3. 对喷雾针、离子源挡板的影响。
连续测定直接沉淀的样品后，观察喷雾针和离子源的挡板，就可以看到上面有焦黑的一层。（当然，可以通过超声和清洗，除去。），短期对测定似乎没有明显影响。
所以，如果你的质谱有切换阀，建议将前面的（如1-2min左右的）的流出物to wast，这样喷雾针和挡板就会干净很多。
暂时想到这些。
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珍惜人生
19楼2013-02-27 17:25:43
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眸中流逝

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以直接进  但是我们用乙腈一般是三倍体积沉淀，甲醇一般是四倍体积沉淀  不知道这个有没有关系
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20楼2013-03-01 09:45:39
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