24小时热门版块排行榜    

查看: 2047  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

[求助] 表达载体双酶切

本人从T载体上切下目的片段,连到表达载体pQE30上用的是ECORI和SPHI但是酶切就是很难切下来
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

寻找方向,前进
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

catq

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-12-20 22:41:59:
双酶切找个兼容的Buffer很重要,如果找不到能提供两个酶50%活力的buffer,一个办法是增加酶量和酶切时间,但可能出现星号活力,还有一个办法就是分两次单酶切,各选择最高活性的buffer,这个办法可行,就是麻烦点。

NEB中我用下列的Buffer,用Double Digestion Designer设计的。
一开始我查资料看两个酶活性,结果发现1,2,4都貌似很好,系统为啥推荐我用buffer EcoRI,后来咨询后才知道,原来是NEB测试最佳结果推荐。。。
差点走了冤枉路。

DDD设计的



酶活表

6楼2012-03-14 20:24:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-20 15:08:34
junxiao0320(金币+5): ★★★很有帮助 谢谢您,我试一下, 2011-12-20 19:46:33
junxiao0320: 金币+4 2012-03-16 22:03:32
SPHI是不是酶切效率不高,能不能加大酶量过夜酶切?再有NEB他们现在有许多HF的酶,楼主可以查一下看有没有SPHI。
jiayoubashaonian
2楼2011-12-20 11:58:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
junxiao0320: 金币+2 2012-03-16 22:03:26
楼上说的对,这种情况只能换好一点酶试试了,要不就只能换酶切位点
在等待中涅槃重生
3楼2011-12-20 14:31:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone(金币+3): 值得注意 2011-12-20 23:55:09
junxiao0320: 金币+4 2012-03-16 22:03:46
你用的是哪个公司的酶,双酶切时要注意下列多种因素:
Buffer是否兼容;酶量是否足够(不同公司在定义酶的活性单位时用的底物并不完全相同,因而即使相同名字的酶,如来自不同的公司,使用量也不尽相同,根据酶单位定义的底物可以进行大致的估算);控制酶切体系的甘油浓度(小于10%);当然质粒的质量也很重要。
4楼2011-12-20 21:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 8/400 2026-03-17 19:03 by Wangjingyue
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 274求调剂0856材料化工 +13 z2839474511 2026-03-11 14/700 2026-03-17 16:51 by share_joy
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-13 5/250 2026-03-17 10:15 by Sammy2
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院,化学方向,295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
信息提示
请填处理意见