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langshi1712

木虫 (正式写手)

[求助] 凋亡western做caspase的疑惑 已有2人参与

做western,凋亡相关的,有几个简单的问题求教一下大家,caspase3 怎么还会有cleaved的呢,呈现两条带,这是为什么呢,代表什么意思呢,数据如何分析啊,还有啊,一般做caspase3的。文献里面的caspase有好几种表达方法,caspase, procaspase,cleaved caspase,各代表什么意思啊,区别在哪里。问题十分幼稚,让大伙见笑了
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泡菜木饺

铁虫 (小有名气)

你好!我最近在做caspase3的western 一直都看不到条带,我用的是0.4的pvdf膜,milipore的抗体,稀释比例特别大,抗体都快用完了,想问一下你当初做的时候选的抗体是哪家的?转膜条件是什么?上扬量是多少?如能帮助万分感激!!
4楼2014-01-13 15:11:00
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xiaoxiao2011

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不记得是不是所有的caspase都这样了,有前体即未活化无活性的,有活化后的具有活性的,就是所谓的pro-和cleaved,具体的中文翻译我也拿不准,但就是这么个意思。准确的检测不应该光看总的caspase,还要看活化的量
2楼2011-12-23 21:31:53
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七彩郁金香

新虫 (初入文坛)

只想说 你做的这个条带很漂亮啊 我最近也在做凋亡 但是cleaved的那个条带都是非常的浅 几乎看不清啊 对了 你做western blot 的条件是什么啊 转膜的条件是什么 一抗和二抗的浓度呢
3楼2013-11-05 20:30:01
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needle_ld

至尊木虫 (正式写手)

木虫学者

【答案】应助回帖

the antibody from Millipore is not as good as from Cell signaling.
Millipore antibody usually stored in fridge but not freezer; it can be repeatedly used for very limited times.
What is your sample loading (total protein), better over 50ug, otherwise you will not get good band no matter how much antibody you are using.
how do you prepare the sample? the RIPA for lysate is very important, especially if you are talking about phospho-peptide.
this is especially for the 4th floor
平等观诸法,悲心救世间。解彼真实性,得佛智慧光。
5楼2014-01-13 23:12:16
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