| 查看: 8979 | 回复: 0 | |||
[交流]
WB检测磷酸化蛋白的详细步骤及注意事项
|
|
1、各位提取的细胞是贴壁的吗？是先消化再加裂解液还是直接向培养皿中加裂解液？我尝试了一下在培养皿（10cm）中加裂解液（300ul），因为不能加的少（盖不过来），最后提取的蛋白只有3mg/ml。而我先收集细胞后再加的裂解液，细胞浓度可以达到40mg/ml。但我担心收集细胞以及洗涤，冰冻裂解（液氮冰冻三次，因为没有超声波仪器）的过程会导致降解。可以说明您具体的提取方法吗？最好有详细的步骤 2、做蛋白磷酸化的PAGE时，各位上样多少ul？每孔多少蛋白？我一开始做的时候一般每孔上样20uL（10uL蛋白+10uL Loadingbuffer），因为提取的蛋白浓度几乎为30-40ug/ul，所以跑出来的蛋白条带往往连在一起。导致内参检测成一条线。 3、各位提取的蛋白现用嘛？还是在-80度保存？ 4、各位转膜的条件是什么？ 谢谢啦。 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有6人回复
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
WB三明治--滤纸大小问题
已经有18人回复
- 今天你纯化蛋白了吗？跪求柱子挂不好的原因。。。。
已经有15人回复
- 牛血清蛋白（BSA）的荧光素（FITC）标记步骤及注意事项
已经有12人回复
- zz大化所发表磷酸化蛋白质组学前瞻性评述论文
已经有7人回复
- WB检测磷酸化蛋白
已经有41人回复
- 【求助/交流】如何除去磷酸化蛋白中残余的ATP
已经有15人回复
- 【求助/交流】急求磷酸化的Smox蛋白抗体和昆虫细胞转染载体
已经有3人回复
- Western Blot 磷酸化蛋白测定问题
已经有9人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
