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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 虫友是如何达到蛋白结晶所需的溶度的
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puluo-880312

木虫 (正式写手)

[交流] 虫友是如何达到蛋白结晶所需的溶度的

蛋白结晶一般需要蛋白质的溶液浓度很高，不知大家是如何达到所需的浓度的？
我知道可以超滤，不知大家还有其它方法没？欢迎踊跃讨论
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1楼 2011-12-09 13:21:14
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fxgowen

金虫 (小有名气)
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puluo-880312(金币+1): 楼下所言极是，对浓缩可以，但不能用来结晶啊 2011-12-10 14:48:05
关于蛋白浓缩，我认为最好的方法是真空冷冻干燥法，此法简便，蛋白质几乎无变性。
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2楼2011-12-10 12:07:45
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whb8161

木虫 (小有名气)
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lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-12-10 14:46:23
puluo-880312(金币+2): 是啊，我也想到超滤管了，可成本太高，一个管子用两三次就不能用了 2011-12-10 14:46:55
楼上所言差矣，结晶用的蛋白最忌用冷冻干燥，容易造成构象不均一。一般最常用超滤管，还有反透析
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3楼2011-12-10 13:14:03
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nach

铜虫 (著名写手)
puluo-880312(金币+1): 超滤一是慢，二是损耗大啊 2011-12-10 14:49:17
大中小超滤....
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4楼2011-12-10 14:32:47
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whb8161

木虫 (小有名气)
★
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超滤管每次用完后及时用buffer清洗干净后，用ddH2O泡着放4度保存，一般能用10次左右。
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5楼2011-12-10 15:12:38
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nach

铜虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by whb8161 at 2011-12-10 08:12:38:
超滤管每次用完后及时用buffer清洗干净后，用ddH2O泡着放4度保存，一般能用10次左右。

超滤时间长了滤膜会破，我是万万不敢用第二次
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6楼2011-12-10 16:06:28
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whb8161

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-12-11 12:41:42
引用回帖:
6楼: Originally posted by nach at 2011-12-10 16:06:28:
超滤时间长了滤膜会破，我是万万不敢用第二次

小于3000g，离心10小时没有问题.
一般用之前，我都会检漏，看能不能再用。
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7楼2011-12-10 20:53:38
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chloe.k

铁虫 (初入文坛)
★
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puluo-880312(金币+1): 谢谢，我会认真考虑的 2011-12-28 23:03:37
我的超滤管都用很多次啊，还有一个方便便宜的就是用AS沉淀，不过这是看蛋白能否在AS条件下析出后还能复性。我一般用4M AS  4℃沉淀，高速离心，在根据你的浓度要求加BUFFER溶解就可以了。
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8楼2011-12-28 16:27:08
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