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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western 结果220KD 蛋白还好， actin竟然让我凌乱了
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athenawj

新虫 (初入文坛)

[交流] western 结果220KD 蛋白还好， actin竟然让我凌乱了

30mA转膜过夜,大蛋白都有，actin竟然杂不出来，图也很诡异。难道是转透了？另外，我在转膜缓冲液里加了SDS，是不是有影响到actin?
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1楼 2011-12-06 20:08:27
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athenawj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wangleimin at 2011-12-08 09:50:42:
这么大的目的蛋白，我们一般都是40-90kda的，转膜120分钟，效果很好啊，转膜液中加sds这个也没见过，在电泳时SDS作用是带着蛋白分子往下跑的

SDS可以促进大蛋白脱离凝胶进入膜里，也是论坛里看到的
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11楼2011-12-08 21:49:06
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athenawj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by athenawj at 2011-12-06 20:08:27:
30mA转膜过夜,大蛋白都有，actin竟然杂不出来，图也很诡异。难道是转透了？另外，我在转膜缓冲液里加了SDS，是不是有影响到actin?

大家帮分析一下原因呗
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2楼2011-12-06 20:09:46
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terry130

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
athenawj(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+2): good 2011-12-06 22:50:44
不会透的，SDS也不会影响。既有可能是你自己样本或者抗体的问题，你有没有跑positive control？
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4楼2011-12-06 21:15:28
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apple6299

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
athenawj(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+2): good！ 2011-12-06 22:52:42
是不是转过头了呀  过夜 太久了吧  actin只有43KD的样子喔   我记得那时自己做的条件是40mA转40-50min，封闭过夜，杂交效果还是蛮好的 单一的条带，挺漂亮。  GAPDH的就没那么好弄
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5楼2011-12-06 21:58:28
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