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小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答完结子版 » 学术实验 » [实验]医学基础实验:如 血型测定
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luhua8307

金虫 (小有名气)

[交流] [实验]医学基础实验:如 血型测定

求下面实验的电子版材料:
1:酶联免疫吸附实验
2:血清谷丙转氨酶的测定
3:血型测定
我的电子邮箱是luhua8307@163.com
谢谢了



谢谢wangwx2001
还有下面两个你有不?

[ Last edited by luhua8307 on 2007-1-15 at 17:04 ]
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1楼 2007-01-15 16:51:39
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wangwx2001

木虫 (正式写手)
生物秀实验频道——专业生物实验中心
http://www.bbioo.com/bio101/
这里比较多。
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5楼2007-01-15 17:12:02
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wangwx2001

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
luhua8307(金币+3):谢谢wangwx2001
血红蛋白含量测定/血型检定

［目的要求］
学习测定血红蛋白含量的基本方法；学习鉴别血型的基本方法；掌握ABO血型的鉴定原理与方法。
［基本原理］
1.将原来位于红细胞内的亚铁血红素转变成高铁血红素，后者呈较稳定的棕色，可与血红蛋白仪中的标准色进行比色，得到每升血液中所含的血红蛋白克数。
2.血型通常是根据存在于红细胞膜外表面的特异性抗原(凝集原)来确定的。血清中的抗体(凝集素)可与红细胞膜上不同的相应抗原结合，产生凝集反应。
［实验器材］血红蛋白仪，标准比色液，血红蛋白测定液，蒸馏水，标准血清，采血针，消毒牙签，载玻片，试管架，小试管，生理盐水，碘酒，75%酒精，等等。
［方法与步骤］
一．        血红蛋白含量的测定
1.        熟悉血红蛋白仪
2.        取5ml血红蛋白测定液于小试管中
3.        常规消毒指尖，采血
4.        用一次性毛细取血管吸取20μl血样，迅速吹入血红蛋白测定液中，搅匀
5.        比色，读数。
二．        血型检定
1.        在载玻片两端各滴抗A和抗B标准血清一滴，并加以标记；
2.        常规消毒，穿刺采血，在载玻片两端的标准血清中各滴加一滴血液，混匀；
3.        静置15分钟后，观察凝集反应结果。
［注意事项］
1.        防止在进行操作时相互污染。操作中应严格分离各种检测用品，注意吸取标准血清的滴管和搅拌用的竹签等用品绝不能混用；
2.        判断红细胞凝集，要注意时间和温度。
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2楼2007-01-15 17:00:50
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wangwx2001

木虫 (正式写手)

酶联免疫吸附实验（ELISA）

★ ★ ★ ★
luhua8307(金币+4):非常感谢wangwx2001
一、实验目的：
酶联免疫吸附试验是免疫酶技术的一种，免疫酶技术属于三大标
记技术之一，掌握该试验的原理和主要技术，了解三大标记技术的异同及各自的主要应用。
二、实验原理：
酶联免疫吸附试验（ELISA）是应用酶标记的抗体（或抗原）在固相支持物表面检测未知抗原（或抗体）的方法。酶与抗体（或抗原）交联后，再与集合结合在固相支持物表面的相应抗原或抗体反应，形成酶标记抗体-抗原复合物，此时加入酶底物和显色剂，在酶催化底物液体后呈现显色反应，液体显色的强弱和酶标记抗体-抗原复合物的量成正比，借此反映出待检测的抗原或抗体量。
酶联免疫吸附试验是利用抗原-抗体的免疫学反应和酶的高效催化底物反应的特点，具有生物放大作用，所以反应灵敏，可检出浓度在ng水平。在免疫反应部分，抗原-抗体的亲和力、抗原和半抗原的性质、测定方法的实验条件、酶标记物的性质等因素影响反应的敏感性。在酶学反应部分，酶的浓度、底物的浓度、反应pH和温度、酶的抑制剂和激活剂等因素液影响反应的敏感性。
酶联免疫吸附试验中所使用的试剂都比较稳定，按照一定的实验程序进行测定实验结果重复性较好，有较高的准确性。酶联免疫吸附法成本低，操作简便，可同时快速测定多个样品，不需要特殊的仪器设备。ELISA法测定技术与其他技术结合发展成为专门的分析方法，如与电泳技术结合的免疫印迹技术，与层析技术结合的层析-ELISA技术等已成为生物实验室的常规技术。
三、试剂与器材：
1. 聚苯乙烯微量细胞培养板(平板, 48, 96孔)。
2. 酶联免疫检测仪
3. 辣根过氧化物酶羊抗兔IgG, 工作稀释度1:1000。
4. 包被液:：0.05mol/L pH9.6碳酸缓冲液,4℃，保存,　Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸馏水稀释至100 ml。
5. 稀释液：0.01mol/LpH7.4 PBS--Tween--20, ４℃，保存. NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4.12H2O 2.9g, Tween—20，0.5ml. 蒸馏水加至1000ml。
6. 洗涤液：同稀释液
7. 封闭液：0.5%鸡卵清蛋白，pH7.4 PBS。
8. 邻苯二胺溶液(底物)：临用前配制 0.1M 柠檬酸(2.1g/100ml), 6.1ml 0.2M Na2HPO4.12H2O　(7.163g/100ml)　6.4ml, 蒸馏水12.5ml, 邻苯二胺10mg, 溶解后, 临用前加30%H2O2 40 微升。
9. 终止液：2mol/LH2SO4。
四、操作方法：
1.包被抗原：用包被液将抗原作适当稀释, 一般为1～10微克/孔，每孔加200微升，37℃温育1小时后，4℃冰箱放置16～18小时。
2. 洗涤：倒尽板孔中液体，加满洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。
3. 加封闭液200微升，37℃放置一小时。
4. 洗涤同2。
5. 加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释,，每孔200微升。同时作稀释液对照。37℃放置2小时。
6. 洗涤同2。
7. 加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小时。
8. 洗涤同2。
9. 加底物：邻苯二胺溶液加200ml，室温暗处10--15分钟。
10. 加终止液：每孔50微升。
11. 观察结果：用酶联免疫检测仪记录490nm读数。
五、关键步骤与注意事项：
1、酶标记抗体以及待检样本的使用浓度应事先滴定
2、保存的血清切忌反复冻融，以免降低血清中抗体或抗原的免疫学活性。
3、酶-底物反应时间除人为规定（常规规定为30分钟）外，还可以阳性参考标本的OD值达到1.0时为反应终点。
4、底物液一定要在临用前现配。
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3楼2007-01-15 17:04:04
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wangwx2001

木虫 (正式写手)

血清谷丙转氨酶(SGPT)的测定

★ ★ ★
luhua8307(金币+3):谢谢
http://www.ebioe.com/bio101/molecular/et/200609/7289.html
【目的和要求】
1. 了解谷丙转氨酶活性测定的基本原理。
2. 掌握谷丙转氨酶活性测定的方法。
【实验原理】
血清谷丙转氨酶(SGPT)能催化丙氨酸和α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。丙酮酸在酸性条件下与2，4－二硝基苯肼可缩合生成丙酮酸二硝基苯腙，其在碱性条件下呈现棕红色，在520nm处有最大吸收。根据颜色的深浅，通过比色法可计算出酶活性。GPT在肝脏中含量最多，当某种药物对肝脏早晨损害或病毒肝炎的急性阶段，由于肝细胞受损， GPT就释放到血液中，使血清中此酶水平明显升高。因此测定血清谷丙转氨酶的活性可作为诊断肝病的重要指标。
【实验试剂和器材】
（一）试剂
1. 0.1M磷酸盐缓冲液（pH7.4）
2. 丙酮酸标准液（2μMol/ml）
准确称取22mg纯净丙酮酸钠，用0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液定容至100ml。
3. 谷丙转氨酶底物溶液
准确称取α－酮戊二酸29.2mg（2mM）， DL－丙氨酸1.78g（200mM），溶于50ml 0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液中，用20% NaOH调pH为7.4，然后加以上磷酸盐缓冲液至100ml，加几滴氯仿防腐，冰箱保存可放一周。
4. 2，4－二硝基苯肼溶液（1mM）称取2，4－二硝基苯肼20mg，置于100ml容量瓶中，先用10ml浓盐酸溶解后，再加水稀释到刻度。
5. 0.4M氢氧化钠。
（二）器材
试管及试管架， 0.1、0.5 、1及5ml吸量管，恒温水浴，722型分光光度计。
【实验方法】
（一）标准曲线绘制
取6支干燥洁净的试管，按下表操作：

以吸光度值为纵坐标，酶活力单位数为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。
（二）血清SGPT活力测定
取4支干燥洁净试管，按下表操作：

【注意事项】
1. 在测定SGPT时，应事先将底物、血清在37℃水浴中保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。
2. 标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的，超过500U时，需将样品稀释。
3. 转氨酶只能作用于α－L－氨基酸，对D－氨基酸无作用。实验室多用α－DL－氨基酸（较L－氨基酸价廉），若用L－氨基酸，则用量减半。
4. 溶血标本不宜使用，因血细胞中转氨酶活力较高，会影响测定效果。
5. 血清样品的测定需在显色后30分钟内完成。
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4楼2007-01-15 17:09:46
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