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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切
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wskxbxf

新虫 (小有名气)

[交流] 双酶切 已有1人参与

请大家指点：基因组DNA双酶切之后，为什么跑电泳什么都看不出来呢，上样量是10微升，是因为切完之后浓度太小了吗？还是别的什么原因，在做AFLP，酶切连接之后电泳都没有明显结果，但是做选扩增PCR结果弥散分布在100-1000bp之间，求指点 谢谢各位了
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1楼 2011-12-06 10:45:22
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
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西瓜(金币+1): 鼓励热心应助！ 2011-12-06 22:48:02
引用回帖:
12楼: Originally posted by wskxbxf at 2011-12-06 21:18:19:
继续问一个问题啊，呵呵，就是您当时切的24小时，大体系的话也应该有不少蒸发吧，在做时间梯度的时候，是切的一管，然后到一定时间就取出一些供后期的检测还是每个时间段都做了一管呢？

分别用不同的酶来切，每种酶一管，然后到一定时间就取出一些供后期的检测。
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jiayoubashaonian
13楼2011-12-06 22:46:01
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
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wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-12-06 14:54:50
基因组DNA双酶切之后，为什么跑电泳什么都看不出来呢?很有可能是楼主的上样量太少！
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jiayoubashaonian
2楼2011-12-06 13:44:14
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wskxbxf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-12-06 13:44:14:
基因组DNA双酶切之后，为什么跑电泳什么都看不出来呢?很有可能是楼主的上样量太少！

谢谢回复 我用的是20微升的双酶切体系 DNA加的300ng左右，点样点了10微升 依您看 该点多少呢  求指导 不胜感激
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3楼2011-12-06 16:12:10
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+3, MolEPI+1): 鼓励积极应助！ 2011-12-06 20:05:34
楼主，我们当时做Southern blot时验证酶切是否完全是这样来的：DNA 浓度20-25ng/ul，酶切过夜后，取6-8ul加上loading buffer，0.8%胶，100V左右跑电泳验证。
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jiayoubashaonian
4楼2011-12-06 17:11:38
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