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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助关于蛋白质脱盐的问题
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yajune

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 求助关于蛋白质脱盐的问题 已有1人参与

刚开始进行一些蛋白方面的研究，这方面知识很欠缺。我现在要做的内容大概是这样的：用文献方法从不同的样品中提出同一种酶，提出的酶中含有硫酸铵和胆酸钠两种盐，需要先脱盐后再对各个样品中的酶进行活性测定。另外，我要测的酶是个复合物，没有比较确切的分子量，文献中脱盐采用的是透析法，但是没说用的多大孔径的。。。查了很多地方也没找到合适的脱盐方法，请教各位高手有没有比较适合同时进行多个（约10个）少量蛋白质样品（约1-2ml)脱盐的方法，只要脱盐就可以，不需要浓缩，当然脱盐过程中最好不要大幅度降低浓度。另外，根据你们的经验我应该选择多大孔径的分子筛？请讲讲除超滤离心以外的方法，我对这个方法不是很信任，准备最后再考虑这个方法
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1楼 2011-12-04 22:15:09
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): Good 2011-12-07 18:48:43
yajune(金币+5): 非常感谢你的耐心解答 2011-12-08 13:10:12
脱盐的话没有问题，你可以先试试G-25，但是如果对纯度要求高的话，你就装一个长柱子，你可以先用G-25看看效果怎么样。
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7楼2011-12-07 08:14:02
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
yajune(金币+1): 谢谢，请问透析适合同时多个样品的脱盐么？ 2011-12-05 14:02:11
西瓜(金币+1): 专家辛苦！ 2011-12-05 18:11:08
少量的话用透析也可以，要浓缩的话透析完后透析袋外面加点大分子量的PEG。
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2楼2011-12-05 07:38:10
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
yajune(金币+2): 谢谢，我就脱盐就可以不用分离蛋白，我想要的那个酶是个复合物，分子量查不到 2011-12-05 13:57:14
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-12-05 18:11:36
脱盐的话就用脱盐柱了，最常用的是G25，但是也不知你要分的哪些物质分子量是不是很接近，如果不接近的话，可以用脱盐柱，如果分子量很接近你就要想别的办法了，你要是想知道用什么分子筛的话，最好把你要分离的各个蛋白的分子量说一下，这样的话，我才能知道你用哪种脱盐柱。
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3楼2011-12-05 08:40:29
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yajune

铁杆木虫 (职业作家)
3楼的高手，先谢谢你啊，我还有个问题，我那个酶是复合物，结构比较复杂，查不到分子量。。。然后我就想脱硫酸铵和胆酸钠这两种盐，硫酸铵分子量132，胆酸钠是400多，根据这个能选脱盐柱么，还有就是脱盐柱回收率高么？适合同时脱十来个样品么？
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4楼2011-12-05 14:01:16
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