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yajune

木虫 (职业作家)

[求助] 求助关于蛋白质脱盐的问题 已有1人参与

刚开始进行一些蛋白方面的研究,这方面知识很欠缺。我现在要做的内容大概是这样的:用文献方法从不同的样品中提出同一种酶,提出的酶中含有硫酸铵和胆酸钠两种盐,需要先脱盐后再对各个样品中的酶进行活性测定。另外,我要测的酶是个复合物,没有比较确切的分子量,文献中脱盐采用的是透析法,但是没说用的多大孔径的。。。查了很多地方也没找到合适的脱盐方法,请教各位高手有没有比较适合同时进行多个(约10个)少量蛋白质样品(约1-2ml)脱盐的方法,只要脱盐就可以,不需要浓缩,当然脱盐过程中最好不要大幅度降低浓度。另外,根据你们的经验我应该选择多大孔径的分子筛?请讲讲除超滤离心以外的方法,我对这个方法不是很信任,准备最后再考虑这个方法
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尚善若水-lyy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lihuan0525 at 2011-12-07 08:14:02
脱盐的话没有问题,你可以先试试G-25,但是如果对纯度要求高的话,你就装一个长柱子,你可以先用G-25看看效果怎么样。

脱盐的效果怎么样啊
10楼2014-09-02 17:06:46
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查看全部 12 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


yajune(金币+1): 谢谢,请问透析适合同时多个样品的脱盐么? 2011-12-05 14:02:11
西瓜(金币+1): 专家辛苦! 2011-12-05 18:11:08
少量的话用透析也可以,要浓缩的话透析完后透析袋外面加点大分子量的PEG。
2楼2011-12-05 07:38:10
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
yajune(金币+2): 谢谢,我就脱盐就可以不用分离蛋白,我想要的那个酶是个复合物,分子量查不到 2011-12-05 13:57:14
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-12-05 18:11:36
脱盐的话就用脱盐柱了,最常用的是G25,但是也不知你要分的哪些物质分子量是不是很接近,如果不接近的话,可以用脱盐柱,如果分子量很接近你就要想别的办法了,你要是想知道用什么分子筛的话,最好把你要分离的各个蛋白的分子量说一下,这样的话,我才能知道你用哪种脱盐柱。
3楼2011-12-05 08:40:29
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yajune

木虫 (职业作家)

3楼的高手,先谢谢你啊,我还有个问题,我那个酶是复合物,结构比较复杂,查不到分子量。。。然后我就想脱硫酸铵和胆酸钠这两种盐,硫酸铵分子量132,胆酸钠是400多,根据这个能选脱盐柱么,还有就是脱盐柱回收率高么?适合同时脱十来个样品么?
4楼2011-12-05 14:01:16
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