24小时热门版块排行榜    

查看: 2077  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

shwkx1987

新虫 (小有名气)

[求助] 求救啊!请高手诊断病因所在,关乎实验生死.(免疫荧光技术)

各位姐妹、兄弟:
       小弟这学期做免疫荧光,到现在了一直做不出漂亮的片子,实在没招了,快急死了。现在向各位求救。我把我的过程和结果附上(染中等纤维),还请各位赐教啊。
实验步骤:
1、用pH8.0的PBS浸泡细胞爬片,5min/3次
2、用预冷的甲醇,在-20度固定10min
3、用pH8.0的PBS浸泡细胞爬片,5min/3次
4、室温封闭1h。封闭液:0.5%山羊血清、0.3%tritonX-100
5、加一抗,4度过夜
6、用pH8.0的PBS浸泡细胞爬片,5min/3次
7、暗处加二抗,染色2h
抗体稀释液:pbs、0.1%BSA、0.3%tritonX-100.
所有用的试剂配方都是按抗体说明书配置





[ Last edited by amisking on 2011-12-2 at 19:47 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

免疫实验

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shwkx1987

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2011-12-02 21:30:33:
我最近也在做免疫荧光,感觉你的方法比我的少了几步。
1 我用的固定液是4%多聚甲醛,并且固定30分钟后,60度烤片过夜,或6个小时。
2 我还有抗原修复的过程,你可以修复下。
3我是封闭半个小时。
4 二抗我也是 ...

谢谢你的回复。你是做的细胞爬片还是组织切片啊,60度烤片,那不会干了吗?至于抗原修复我也查了有些资料是有这样的做法,它在组织切片中庸的较多,细胞爬片较少。而且抗体说明书中也没有这一步。还请指教
3楼2011-12-03 13:43:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
yqbter: 金币+3, 感谢分享! 2012-05-30 08:12:51
我最近也在做免疫荧光,感觉你的方法比我的少了几步。
1 我用的固定液是4%多聚甲醛,并且固定30分钟后,60度烤片过夜,或6个小时。
2 我还有抗原修复的过程,你可以修复下。
3我是封闭半个小时。
4 二抗我也是半个小时。
5 如果你有条件,最好用DAPI染下细胞核。更容易观察。
6 你用什么封片?最好用配制的缓冲液封片,否则易淬灭。

希望对楼主有帮助。
2楼2011-12-02 21:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

shwkx1987(金币+1): 2011-12-06 18:16:27
引用回帖:
3楼: Originally posted by shwkx1987 at 2011-12-03 13:43:26:
谢谢你的回复。你是做的细胞爬片还是组织切片啊,60度烤片,那不会干了吗?至于抗原修复我也查了有些资料是有这样的做法,它在组织切片中庸的较多,细胞爬片较少。而且抗体说明书中也没有这一步。还请指教

我做的是细胞爬片,抗原修复是因为在固定时,可能由于蛋白相互作用而封闭了抗原决定簇,有些抗原决定簇在外面,是不用修复的,有些不修复就做不出结果。跟切片和爬片关系不大。
60度烤片主要是防脱片,如果细胞不掉片,不用烤的。烤片后还要水化的。
4楼2011-12-03 15:57:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shwkx1987

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by kaobo2012 at 2011-12-03 15:57:32:
我做的是细胞爬片,抗原修复是因为在固定时,可能由于蛋白相互作用而封闭了抗原决定簇,有些抗原决定簇在外面,是不用修复的,有些不修复就做不出结果。跟切片和爬片关系不大。
60度烤片主要是防脱片,如果细胞 ...

谢谢你。
5楼2011-12-06 18:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 07:55 by popo0625
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +3 德尚中行 2026-08-27 3/150 2026-08-28 15:24 by rongshuxia
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见