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mitchem

铁虫 (著名写手)

[求助] DNA杂交条件？？？

有两条含有互补碱基的寡核苷酸序列，需要杂交成双链，应该怎么做？

需要的溶液、温度等的条件是什么？
我的大概是15个碱基的
  感觉文献写的都不大一样。
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tryit,youwillwin.
1楼 2011-12-01 11:42:28
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chaoyu

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
mitchem(金币+5): ★★★很有帮助 2011-12-22 15:50:20
mitchem(金币+5): 2012-01-09 15:56:01
95度是为了先把里面有双链的解旋，然后杂交。
我们一般都是37度40min，溶液的话就是tris-hcl缓冲，ph8左右。
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你最大的敌人一直是你自己！
5楼2011-12-20 16:30:37
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mitchem

铁虫 (著名写手)
难道就木有人知道么？难道就木有人了解么？
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tryit,youwillwin.
2楼2011-12-01 21:02:48
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cyh23456

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
mitchem(金币+5): ★有帮助 2011-12-22 15:49:59
mitchem(金币+5): ★有帮助 2012-01-09 15:55:53
引用回帖:
2楼: Originally posted by mitchem at 2011-12-01 21:02:48:
难道就木有人知道么？难道就木有人了解么？

杂交时缓冲液和反应条件很多的 我们实验室一般都用pH=7.4的tris-HCl 缓冲液（10 mM Tris-HCl，1mM EDTA，50mM NaCl）。杂交时95°C 5分钟，然后37°C孵育过夜。
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3楼2011-12-19 10:18:25
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mitchem

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cyh23456 at 2011-12-19 10:18:25:
杂交时缓冲液和反应条件很多的 我们实验室一般都用pH=7.4的tris-HCl 缓冲液（10 mM Tris-HCl，1mM EDTA，50mM NaCl）。杂交时95°C 5分钟，然后37°C孵育过夜。

95度这么高的温度，DNA会不会变性啊……
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tryit,youwillwin.
4楼2011-12-20 15:18:58
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