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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 维生素B12有关物质的测定系统适用性实验无降解峰
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杂面包子

新虫 (小有名气)

[求助] 维生素B12有关物质的测定系统适用性实验无降解峰

如题，照中国药典2010版测定VB12有关物质，系统适用性实验方法如下：精密量取维生素B12 25mg，加10ml水溶解，加入0.1%的氯胺T溶液5ml，0.05mol/L盐酸0.5ml，加水定容至25ml，静置5min，取1ml，加流动相定容至10ml，作为系统适用性溶液。
色谱条件如下：C18柱，检测波长361nm，流动相0.028mol/L磷酸氢二钠：甲醇=76:24，流速1ml/min，柱温30℃，进样量10ul。
色谱图应出现VB12和一个降解峰，相对保留时间0.86左右。可我换了几根柱子，重复了3次都没有发现降解峰的出现，把氯胺T浓度加大也没作用
求前辈高人指点
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1楼 2011-11-30 13:06:49
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杂面包子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by leecius at 2011-11-30 16:39:53:
你如果怀疑是试剂出问题的话，我建议你们再买一瓶，但是前提是你先排除是试剂的问题。

我所有操作都是照药典做的，柱子也换了3根，试剂已经申请买了，就是现在不知道还有什么其他的影响因素
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5楼2011-11-30 16:47:33
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

杂面包子(金币+1): 谢谢指教，我把氯胺T浓度提高到1%，盐酸加样量也提高，还是没有出现降解峰，会不会是试剂失效？ 2011-11-30 16:38:24
楼主可以适当加大降解破坏的条件，看是方法问题还是破坏问题。
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心似白云常自在，意如流水任东西。
2楼2011-11-30 13:22:03
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

杂面包子(金币+1): 谢谢 2011-11-30 16:47:57
你如果怀疑是试剂出问题的话，我建议你们再买一瓶，但是前提是你先排除是试剂的问题。
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心似白云常自在，意如流水任东西。
3楼2011-11-30 16:39:53
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杂面包子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by leecius at 2011-11-30 13:22:03:
楼主可以适当加大降解破坏的条件，看是方法问题还是破坏问题。

谢谢，我加大破坏条件以后，只出现了2个未知峰，相对保留时间为0.5，和药典所述的相对保留时间0.86相差很远，和网上找到的系统适用性图也差很远。网上也没查到VB12的降解原理，不知道是试剂问题还是操作过程出得问题。
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4楼2011-11-30 16:43:58
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