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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 测定总黄酮含量（三氯化铝法）的显色方法的确定
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zhang5363

木虫 (小有名气)

[求助] 测定总黄酮含量（三氯化铝法）的显色方法的确定

大家好，最近在做总黄酮的含量测定，考虑到硝酸铝法的测定值偏高，所以用三氯化铝法，文献上用此方法的显色方法不统一：1、有的只用Alcl3；2、有的还用了NaAc，前者用2ml，后者用3ml，或者前者用3ml，后者用5ml；3、还有的再加了NaAc-HAc缓冲盐。我发现第2的方法中，Alcl3加入0.5ml，NaAc加3ml的时候，吸光度比加入0.2、1ml的都大（正如文献“三氯化铝比色法测定中药中总黄酮含量的方法改进”上所说的一样），为什么？第3法中，NaAc-HAc缓冲盐PH<7，我知道有有阻碍溶液pH变化的作用，那酸性环境是为了让酸性的黄酮溶解出来，以利于测定吗？我想问下用哪种方法好，为什么？怎么评定那种好
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1楼 2011-11-30 00:53:25
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平常心11

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
novus(金币+1): 多些交流！ 2011-11-30 17:37:31
zhang5363(金币+2): 2011-12-01 19:25:10
本方法属于比色测定，试剂用量应该是过量的才能反映完全或者彻底。试剂多了底色或者是背景色会不同，可能会有吸收干扰，所以你应该用试剂空白校正，就是除被测成分以外的溶液做空白进行校正，才能排除干扰的吧。
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4楼2011-11-30 15:49:21
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独叶一支枪

木虫 (著名写手)
Me用的是Ch.P2010介绍的方法。
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2楼2011-11-30 10:40:37
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zhang5363

木虫 (小有名气)
硝酸铝法存在很多问题，我的样品里有咖啡酸，所以，就没用硝酸铝法。
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3楼2011-11-30 12:59:54
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difang18

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
karl2100(金币+1): 多谢指教！ 2011-12-05 00:01:40
zhang5363(金币+4): NaAc的加入，使得吸收波长红移，故也作为总黄酮的检测试剂，NaAc/HAc是一组缓冲溶液，控制PH，形成一个稳定的环境 2011-12-08 01:02:11
zhang5363(金币+5): ★★★很有帮助 2012-03-06 10:30:24
黄酮化合物若分子中具有3-羟基、4-羰基或5-羟基、4-羰基或邻二酚羟基，则可与三氯化铝显色；

而NaAc的加入，能使黄酮化合物上酸性较强的酚羟基解离，而导致紫外吸收波长改变（变长，而变化的范围因具体情况而定）；加入量的改变可能会改变波长的变化情况，而出现你说的加入量的改变而导致吸光度的变化；

而再加一个HAc，可能是你所说的调节PH来让黄酮游离的吧；正好NaAc/HAc组成一组缓冲溶液，好控制PH。
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5楼2011-12-04 21:28:55
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