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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶基因的过表达怎么检测呢
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wenrong521

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶基因的过表达怎么检测呢

各位大侠，我是刚开始做转基因表达的，目的基因是一种酶，要在菌体里过表达，我查过该酶的抗体，一抗买不到商品化的，所以好像不能做免疫试验，做了RT-PCR结果实验菌株RNA水平比对照组还低。我该怎么办呢？还有什么办法来验证过表达呢？求救啊~~~
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1楼 2011-11-29 21:44:57
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

wenrong521(金币+2): 2011-12-01 11:25:41
SDS-PAGE检测蛋白的表达量。
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2楼2011-11-30 07:44:36
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-11-30 07:44:36:
SDS-PAGE检测蛋白的表达量。

同意楼上，western blot检测蛋白表达水平。
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jiayoubashaonian
3楼2011-11-30 10:34:05
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wenrong521

新虫 (初入文坛)
亲们，我那个一抗买不到怎么做western blot 呢？还有别的办法不？
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4楼2011-11-30 21:09:11
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wenrong521

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-11-30 07:44:36:
SDS-PAGE检测蛋白的表达量。

亲，酵母里的蛋白很多，SDS-PAGE会不会太混乱啊~我倒是跑过一次，但是什么都没看出来，一片混乱啊~~~
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5楼2011-11-30 21:17:45
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

如果真是过表达，再多都能看出来的，过表达的蛋白跟对照相比非常明显的。
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6楼2011-12-01 08:49:52
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

您应该分析该酶不表达的原因。RT-PCR已经说明该基因在您的宿主菌里的转录已近很低，而SDS-PAGE又没有目的带；我的判断是该酶未表达或表达很低。
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静心做事。
7楼2011-12-01 09:12:43
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wenrong521

新虫 (初入文坛)
wenrong521: 回帖置顶 2011-12-01 18:58:27
引用回帖:
7楼: Originally posted by jiangyhai at 2011-12-01 09:12:43:
您应该分析该酶不表达的原因。RT-PCR已经说明该基因在您的宿主菌里的转录已近很低，而SDS-PAGE又没有目的带；我的判断是该酶未表达或表达很低。

我没有确定不表达啊，我觉得只是RNA水平上没有体现出来，因为我做生长曲线发现实验组生长明显快~
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8楼2011-12-01 11:25:12
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lilihuang1125

金虫 (初入文坛)
wenrong521: 回帖置顶 2011-12-01 18:58:23
直接做In vitro或in vivo实验检测产物就行了
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9楼2011-12-01 15:24:16
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