| 查看: 1446 | 回复: 5 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
thestormcong银虫 (小有名气)
|
[求助]
RED基因敲除
|
||
| 各位师兄师姐好，小弟最近想做red重组系统的基因敲除，现在在设计引物，查看了一些文献，都说鉴定引物需要设计在同源臂两侧，那为什么鉴定引物就不能设在同源臂上呢，我想设在同源臂上看看，这样行吗？还有各位师兄师姐都提供以下相关的经验技术，因为以前也从来没做过这个，没啥经验呢。还有我要敲除的菌株没有能够查到其基因组序列，ncbi上没有提交，而相近的一些菌株则有这个基因，这些基因比对了之后80-90%都是同源的，我能否直接根据相近的这些基因来设计引物呢，请求指教，非常感谢！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有201人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大肠杆菌基因重组时PKD46高温怎么都消除不了
已经有25人回复
- 目的基因导入到受体细胞会发生基因重组吗？说说原因！
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于基因敲除的方法
已经有18人回复
- 【求助/交流】芽孢杆菌属的基因敲除方法
已经有12人回复
- 【求助/交流】微生物基因敲除请进
已经有8人回复
- 【求助/交流】请教关于大肠杆菌lamda RED重组问题
已经有23人回复
thestormcong
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 462.1
- 红花: 3
- 帖子: 103
- 在线: 109.2小时
- 虫号: 1410070
- 注册: 2011-09-20
- 专业: 生物化学
送鲜花一朵 
6楼2011-11-27 12:11:20
【答案】应助回帖
★
1949stone(金币+1): 同意 2011-11-25 23:14:25
1949stone(金币+1): 同意 2011-11-25 23:14:25
| 可以 设计在两侧 只是为了证明重组的locus是正确的 依照你的情况 没有确切的序列 而且如果设计在两侧 同源性可能连80-90%都没有了 没法设计引物 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
2楼2011-11-25 22:33:54
srlee
铁杆木虫 (小有名气)
- MolEPI: 7
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 4485.7
- 散金: 17
- 红花: 3
- 帖子: 219
- 在线: 510.1小时
- 虫号: 802845
- 注册: 2009-07-03
- 专业: 生物防治
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): Good！热心！专业！ 2011-11-26 20:36:08
thestormcong(金币+5): 希望能够得到指点。小弟还没有相关经验，谢谢。 2011-11-27 12:09:14
wanhscn(MolEPI+1): 根据楼主反映，理应授予专家指数！补上！ 2011-11-27 16:09:01
wanhscn(金币+4): Good！热心！专业！ 2011-11-26 20:36:08
thestormcong(金币+5): 希望能够得到指点。小弟还没有相关经验，谢谢。 2011-11-27 12:09:14
wanhscn(MolEPI+1): 根据楼主反映，理应授予专家指数！补上！ 2011-11-27 16:09:01
|
1）设计验证引物可以在两侧同源臂上，验证时突变株和野生型PCR条带会有区别很容易看出来的！ 2）如果你要敲除的目的片段很长大于5kb，那么验证时PCR不是很方面，当然也可以设在你要敲出的目的片段上，如果是正确的突变株理论上是P不出来的，而野生型的能P出来！ 3）显然不能依据其他基因的同源序列来设计验证引物的，你可以根据这些同源序列设计一个兼并引物，筛选你的目的基因后再在你的目的基因的基础上walking几个反应不就拿到你要的序列了吗？ 祝实验顺利！ |
3楼2011-11-26 15:15:45
thestormcong
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 462.1
- 红花: 3
- 帖子: 103
- 在线: 109.2小时
- 虫号: 1410070
- 注册: 2011-09-20
- 专业: 生物化学
4楼2011-11-27 11:55:24
