24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 964  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dreamshaker

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] RT-PCR求助

各位大虾:
    新手上路,请指教啊。最近做RT-PCR,内参已经调的差不多了,开始扩目的条带了,但是结果却不尽人意,很是焦急啊。主要难题就是扩出的条带弱,而且有引物二聚体的存在,重复性差。我说的在详细一些,目的条带是300-500bp左右,我用的是退火温度是55度,35cycles。是不是是退火温度的原因?还有啊,引物单子上对的Tm值有两个Tm(1MNa)和Tm(0.05M Na)时的,我应该用那一个啊,如何设计引物的退火温度啊 ,请各位不吝赐教啊,将很感激啊。
    再附上劣图一张,以图为参考给出些意见啊。
    对于图片再做些说明,上下两个目的基因,有点marker(DL2000),5个挨紧的条带是目的条带的不同时间处理,就跑成这个样子了啊,惭愧啊,请各位给点意见。
回复此楼
踏踏实实,体会科研的乐趣
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xan36

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): good 2011-11-25 16:13:54
如果条件允许的话,建议楼主设个温度梯度摸个最适合的温度条件
风雨后的阳光更珍贵
8楼2011-11-25 12:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

lvbobo823

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-11-24 18:22:10
dreamshaker(金币+1): 关于Tm值我有一些了解了,谢谢。 2011-11-25 12:36:48
引物单子上Tm(1MNa)代表作杂交时的温度,Tm(0.05MNa)代表的是PCR时的温度。要做PCR可以按照后一个,一般所示的Tm值都偏低,可以按照自己用软件设计的Tm-(5-10度)来进行PCR 。
hehe
2楼2011-11-24 13:50:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cjzyfx

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-11-24 21:25:54
RT-pcr 忌讳有引物二聚体,建议楼主还是跟换引物,因为引物二聚体跟退火温度关系不是太大!
迷茫的蚊子
3楼2011-11-24 13:56:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励应助!Real-time PCR的成本要高很多,所以很多人会做半定量(普通PCR,跑胶比较条带亮度),不需要专门仪器和耗材,循环数调合适就可以了。 2011-11-24 21:30:00
楼主的结果是要定量吗?比较不同处理时间的RNA水平变化吗?如果是的话,建议直接做REAL TIME PCR
jiayoubashaonian
4楼2011-11-24 19:20:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专业调剂 +3 啦啦啦哭 2026-03-31 3/150 2026-04-01 01:27 by 小懒虫不懒了
[考研] 311(085601)求调剂 +12 liziyeyeye 2026-03-28 13/650 2026-04-01 00:34 by fmesaito
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-31 5/250 2026-03-31 23:08 by liu823948201
[考研] 求调剂,一志愿北林食品与营养095500,301分,已过六级,有科研经历 +3 快乐储蓄罐 2026-03-31 3/150 2026-03-31 20:20 by plum
[考研] 085602 307分 求调剂 +10 不知道叫什么! 2026-03-26 10/500 2026-03-31 19:53 by Dyhoer
[考研] 材料科学与工程339求调剂 +3 hyz0119 2026-03-31 3/150 2026-03-31 18:31 by 1939136013狗壮
[考研] 318求调剂 +10 陈晨79 2026-03-30 10/500 2026-03-31 17:37 by 544594351
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-29 6/300 2026-03-31 16:35 by hypershenger
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +6 Ong3 2026-03-27 6/300 2026-03-31 15:18 by yanflower7133
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-31 4/200 2026-03-31 11:56 by jp9609
[考研] 0817化工学硕调剂 +7 努力上岸中! 2026-03-31 7/350 2026-03-31 09:58 by nalakaiqi
[考研] 293分求调剂,外语为俄语 +5 加一一九 2026-03-31 5/250 2026-03-31 09:39 by zhshch
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +5 小张zxy张 2026-03-26 10/500 2026-03-31 00:29 by jp9609
[考研] 哈尔滨工业大学材料与化工专硕378求调剂 +3 塔比乌斯 2026-03-30 3/150 2026-03-30 22:55 by 无际的草原
[考研] 抱歉 +4 田洪有 2026-03-30 4/200 2026-03-30 21:26 by mumin1990
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工(085600)296求调剂 +25 稻妻小编 2026-03-26 25/1250 2026-03-30 20:11 by 滴滴上岸呀
[考研] 总分293求调剂 +8 加一一九 2026-03-25 11/550 2026-03-29 19:53 by 无际的草原
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
信息提示
请填处理意见