应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组质粒出现问题
101/1返回列表
查看: 2005  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sumoeric

金虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒出现问题

在构建一个质粒，已经将3个片段连接在了一体，并已经与T载体连接在了一起，经过验证是没问题的。现在准备将该目的片段从T载体上面酶切下来与pKC1139连接在一起。目的片段是5.5KB。已经做了两周了，每一次长出来的连质粒都没有，DH5α感受态没有什么问题，已经验证过了，转化的手法也应该没什么问题。

有没有可能是一直都连接不上呢？？还有想求教下，DH5α能容纳的最大质粒是多少？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-23 17:00:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

保护你的大树

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你做过菌液鉴定没有，大小在8-9kb吗？
赞一下 回复此楼
2楼2011-11-24 00:14:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sumoeric

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 保护你的大树 at 2011-11-24 00:14:44:
你做过菌液鉴定没有，大小在8-9kb吗？

您说的是之前的连接在T载体上的质粒吗？
我已经做过鉴定了大小没问题基本就在8kb多一点，而且酶切和PCR的验证也都是正确的。
赞一下 回复此楼
3楼2011-11-24 08:17:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

酶切下了的片段回收浓度太低了   而且片段这么长  不好连
赞一下 回复此楼
hold住
4楼2011-11-24 09:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

保护你的大树

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by sumoeric at 2011-11-24 08:17:18:
您说的是之前的连接在T载体上的质粒吗？
我已经做过鉴定了大小没问题基本就在8kb多一点，而且酶切和PCR的验证也都是正确的。

你可以采用不同的质粒载体比例试试，长度应该还是可以的，我们实验室有人做过这样的长度也是可以的。
赞一下 回复此楼
5楼2011-11-24 10:39:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sumoeric

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-11-24 09:26:26:
酶切下了的片段回收浓度太低了   而且片段这么长  不好连

浓度经过浓缩保证了较高的浓度，可是居然每一次都连接不上而且自连都没有
赞一下 回复此楼
6楼2011-11-24 10:41:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

潇洒姐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以的话，换两种酶切试试
赞一下 回复此楼
7楼2011-11-28 14:36:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

楼主，你这个测序看看吧！
赞一下 回复此楼
每天坚持多一点，以后困难少一点！
8楼2011-11-28 16:49:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)
楼主 你这个问题解决了吗？是啥原因啊？
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-27 19:37:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sumoeric

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by syn1985 at 2012-04-27 19:37:16:
楼主 你这个问题解决了吗？是啥原因啊？

解决倒是解决了  但是还是找不出原因来

把质粒送到北京的一个朋友那一次就做出来了。。。
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-24 17:39:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sumoeric 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 12/600 2026-10-13 20:40 by Merryya
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +9 Isak0320 2026-10-12 13/650 2026-10-13 11:57 by Isak0320
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭