24小时热门版块排行榜    

查看: 1498  |  回复: 9

sumoeric

金虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒出现问题

在构建一个质粒,已经将3个片段连接在了一体,并已经与T载体连接在了一起,经过验证是没问题的。现在准备将该目的片段从T载体上面酶切下来与pKC1139连接在一起。目的片段是5.5KB。已经做了两周了,每一次长出来的连质粒都没有,DH5α感受态没有什么问题,已经验证过了,转化的手法也应该没什么问题。

有没有可能是一直都连接不上呢??还有想求教下,DH5α能容纳的最大质粒是多少?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

保护你的大树

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你做过菌液鉴定没有,大小在8-9kb吗?
2楼2011-11-24 00:14:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sumoeric

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 保护你的大树 at 2011-11-24 00:14:44:
你做过菌液鉴定没有,大小在8-9kb吗?

您说的是之前的连接在T载体上的质粒吗?
我已经做过鉴定了大小没问题基本就在8kb多一点,而且酶切和PCR的验证也都是正确的。
3楼2011-11-24 08:17:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

酶切下了的片段回收浓度太低了   而且片段这么长  不好连
hold住
4楼2011-11-24 09:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

保护你的大树

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by sumoeric at 2011-11-24 08:17:18:
您说的是之前的连接在T载体上的质粒吗?
我已经做过鉴定了大小没问题基本就在8kb多一点,而且酶切和PCR的验证也都是正确的。

你可以采用不同的质粒载体比例试试,长度应该还是可以的,我们实验室有人做过这样的长度也是可以的。
5楼2011-11-24 10:39:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sumoeric

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-11-24 09:26:26:
酶切下了的片段回收浓度太低了   而且片段这么长  不好连

浓度经过浓缩保证了较高的浓度,可是居然每一次都连接不上而且自连都没有
6楼2011-11-24 10:41:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

潇洒姐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以的话,换两种酶切试试
7楼2011-11-28 14:36:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

楼主,你这个测序看看吧!
每天坚持多一点,以后困难少一点!
8楼2011-11-28 16:49:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

楼主 你这个问题解决了吗?是啥原因啊?
9楼2012-04-27 19:37:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sumoeric

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by syn1985 at 2012-04-27 19:37:16:
楼主 你这个问题解决了吗?是啥原因啊?

解决倒是解决了  但是还是找不出原因来

把质粒送到北京的一个朋友那一次就做出来了。。。
10楼2012-05-24 17:39:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sumoeric 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 情人节自我反思:在爱情中有过遗憾吗? +5 瞬息宇宙 2026-02-15 6/300 2026-02-18 12:51 by 月下雪林
[找工作] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 11:09 by lqtl9djx19
[考博] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:54 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:39 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:53 by lqtl9djx19
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:38 by lqtl9djx19
[找工作] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 07:55 by lotyj5cz79
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:40 by lotyj5cz79
[考研] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:38 by lotyj5cz79
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:23 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:08 by lotyj5cz79
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 3/150 2026-02-18 06:53 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 00:40 by tk2gfblvuz
[找工作] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 00:23 by tk2gfblvuz
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-17 23:40 by tk2gfblvuz
[基金申请] 基金正文30页指的是报告正文还是整个申请书 +3 successhe 2026-02-16 4/200 2026-02-17 20:56 by successhe
[基金申请] 今年春晚有几个节目很不错,点赞! +5 瞬息宇宙 2026-02-16 6/300 2026-02-17 12:49 by jymy19840415
[微米和纳米] 球磨粉体时遇到了大的问题,请指教! 10+3 6sbiam 2026-02-12 15/750 2026-02-16 15:03 by tgzxzqj
[基金申请] 过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链 +3 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-16 14:23 by aspect3000
[硕博家园] 江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后 +3 cleverlyy 2026-02-12 3/150 2026-02-12 21:02 by qsdf1
信息提示
请填处理意见