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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 关于EB！
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

[交流] 关于EB！ 已有13人参与

在基因克隆中，常用EB与DNA分子相互结合进行染色，随后进行胶回收等步骤！EB还是与DNA相互结合的吗？EB的结合不会影响后面的实验步骤，导致阴性结果吗？抑或是EB与DNA的结合作用力本来就不是很强呢？
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1楼 2011-11-18 17:17:09
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★
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wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-11-18 19:30:28
溴化乙锭是荧光试剂，拥有可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团，因此用于检测DNA。溴化乙锭对双链的结合强度高于单链，但由于其极易见光分解，因此我觉得对后续试验影响不大。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2011-11-18 18:43:46
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lwtong8320

金虫 (正式写手)
★
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西瓜: 不染色的话，没法割胶再回收啊…… 2011-11-21 22:28:06
EB毒性很强的，染色后还可以胶回收吗？
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努力！努力！再努力！
3楼2011-11-18 19:23:39
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-11-21 22:28:16
溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个力化学上应该有了解吧。。。
按一般分子实验电泳后胶回收再继续实验没问题的，我们都这样做的，对实验没影响。好运，注意安全就行
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4楼2011-11-18 20:04:56
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge
引用回帖:
3楼: Originally posted by lwtong8320 at 2011-11-18 19:23:39:
EB毒性很强的，染色后还可以胶回收吗？

你不胶回收的话你后面的实验咋办呢？
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5楼2011-11-18 23:22:16
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gwbk

木虫 (正式写手)
★
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EB染料处理的DNA是可以切胶回收的，没问题的。
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6楼2011-11-19 01:47:52
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qiaolinkun

银虫 (小有名气)
★
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很多实验室都是EB染后进行胶回收的~~楼主放心用吧~~就是EB毒性太大，楼主染色时要小心~~
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7楼2011-11-19 07:48:56
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刘中青

金虫 (小有名气)
★
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跑胶后把你需要的片段切下来回收，注意宁少勿多，以免沾上不需要的片断
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8楼2011-11-19 14:23:09
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dragoner

新虫 (小有名气)
大家都是这么干的，应该没问题！
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9楼2011-11-19 17:24:48
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hdengmin

木虫 (著名写手)
★
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EB的毒性在实验室根本就算是低毒的，国外很多实验室都是直接赤手捞的，不过不要到处摸，把干净的地方给污染了，做完了把手洗干净就行。
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10楼2011-11-19 22:20:15
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