| 查看: 3628 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
Ag6501金虫 (正式写手)
|
[求助]
枯草杆菌 电转化 已有1人参与
|
|
|
最近做试验又出状况了： 需要往枯草杆菌WB800N里转一个质粒，大概9000bp多，但现在我做每次都能转进去，就是转化效率很低，但我需要很高的转化效率，所以再次求助各位高人了： 枯草芽孢杆菌电转方案（高渗透法）转化 1）接种B . subtilis于3mlLB培养基中，过夜培养.。 2）取2.5ml过夜培养物接入40ml（LB+0.5M 山梨醇）中，37℃，200rpm培养至OD600=0.85~0.95. 3）将菌液冰水浴10 min，然后5000g，5 min，4℃离心收集菌体。 4）用50ml预冷的电转培养基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%甘油），重新吹悬菌体，5000g，5min，4℃离心去上清，如此漂洗4次。 5）将洗涤后的菌体吹悬于1ml电转培养基中，每EP管分装60。 6）将60μl感受态细胞中加入50ngDNA（1~8μl），冰上孵育2min，加入预冷的电转杯（1mm）中，电击一次。 电转仪设置：2.0kv,1mm,电击1次。（电击结果：时间常数=4.5~5.0ms,如果时间常数<4.2 ,则需要增加电转培养基的漂洗次数或者提高感受态的稀释倍数来获得更高的转化效率） 7）电击完毕取出杯子并立即加入1ml RM（LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇），37℃，200rpm，复苏3h后，涂板。37℃，过夜培养。 准备 40ml（LB+0.5M山梨醇）：蛋白胨10g/l , 酵母粉5g/l , NaCl 10g/l , 3.6g山梨醇pH=7.2 200ml电转培养基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%葡萄糖）：18g 山梨醇，18.5g甘露醇，10%甘油。 10ml RM（0.5M山梨醇，0.38M甘露醇）：0.9g山梨醇，0.7g甘露醇。 2个50ml离心管，灭菌。 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有168人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有67人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
12楼2015-05-06 15:06:40
2楼2014-01-10 17:28:28
3楼2014-02-11 13:33:39
Ag6501
金虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1719.7
- 散金: 28
- 红花: 2
- 帖子: 314
- 在线: 203.1小时
- 虫号: 629498
- 注册: 2008-10-18
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
4楼2014-02-14 10:17:50
