| 查看: 3152 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
Ag6501兑换贵宾
|
[求助]
枯草杆菌 电转化 已有1人参与
|
|
|
最近做试验又出状况了： 需要往枯草杆菌WB800N里转一个质粒，大概9000bp多，但现在我做每次都能转进去，就是转化效率很低，但我需要很高的转化效率，所以再次求助各位高人了： 枯草芽孢杆菌电转方案（高渗透法）转化 1）接种B . subtilis于3mlLB培养基中，过夜培养.。 2）取2.5ml过夜培养物接入40ml（LB+0.5M 山梨醇）中，37℃，200rpm培养至OD600=0.85~0.95. 3）将菌液冰水浴10 min，然后5000g，5 min，4℃离心收集菌体。 4）用50ml预冷的电转培养基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%甘油），重新吹悬菌体，5000g，5min，4℃离心去上清，如此漂洗4次。 5）将洗涤后的菌体吹悬于1ml电转培养基中，每EP管分装60。 6）将60μl感受态细胞中加入50ngDNA（1~8μl），冰上孵育2min，加入预冷的电转杯（1mm）中，电击一次。 电转仪设置：2.0kv,1mm,电击1次。（电击结果：时间常数=4.5~5.0ms,如果时间常数<4.2 ,则需要增加电转培养基的漂洗次数或者提高感受态的稀释倍数来获得更高的转化效率） 7）电击完毕取出杯子并立即加入1ml RM（LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇），37℃，200rpm，复苏3h后，涂板。37℃，过夜培养。 准备 40ml（LB+0.5M山梨醇）：蛋白胨10g/l , 酵母粉5g/l , NaCl 10g/l , 3.6g山梨醇pH=7.2 200ml电转培养基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%葡萄糖）：18g 山梨醇，18.5g甘露醇，10%甘油。 10ml RM（0.5M山梨醇，0.38M甘露醇）：0.9g山梨醇，0.7g甘露醇。 2个50ml离心管，灭菌。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有277人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
huangrui1988 
管理员
- 应助: 73 (初中生)
- 金币: 1727.8
- 散金: 20
- 红花: 2
- 帖子: 201
- 在线: 210.1小时
- 虫号: 953497
- 注册: 2010-02-07
- 专业: 微生物资源与分类学
11楼2014-02-27 22:14:02
银杏酸酸
版主
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 370.8
- 散金: 165
- 红花: 1
- 帖子: 71
- 在线: 61.7小时
- 虫号: 2471651
- 注册: 2013-05-19
- 性别: MM
- 专业: 蛋白质组学
2楼2014-01-10 17:28:28
xissy
管理员
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 108.9
- 散金: 16
- 红花: 1
- 帖子: 179
- 在线: 62.7小时
- 虫号: 1221791
- 注册: 2011-03-05
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
3楼2014-02-11 13:33:39
Ag6501
主管区长
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1719.7
- 散金: 28
- 红花: 2
- 帖子: 314
- 在线: 203.1小时
- 虫号: 629498
- 注册: 2008-10-18
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
4楼2014-02-14 10:17:50
