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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建
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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

[求助] 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建

如题，基因片段3.7Kb载体7Kb，Phage载体。
连接了几次都失败了。要么转化后没有长出克隆，要么长出来也是假阳性，小提质粒后酶切片段大小不对额
大片段不好连呢，求高手指教有妙招改进么？？
(转化采用的超级感受态细胞，42度30s)
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许多奇迹，我们相信，才会实现……
1楼 2011-11-17 14:21:26
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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~
引用回帖:
18楼: Originally posted by 天使托 at 2011-11-18 10:28:45:
3.7不算太大吧。。。我也连接过3点几的。。。
连接时间长一些，关键还是连接体系和时间的选择上有些不合适。。。
改进一下就OK了。。。

16度，连接过夜的，大概14个小时左右了，时间该没问题吧。每次都是10ul的体系，载体和片段3：1的
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许多奇迹，我们相信，才会实现……
20楼2011-11-18 11:58:43
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longrna

新虫 (正式写手)
贴上你的连接体系及条件嘛，用哪家公司的酶？
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伟大航线....
2楼2011-11-17 18:06:25
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longrna

新虫 (正式写手)
我们一般4度过夜连接，用NEB的酶
赞一下 回复此楼
伟大航线....
3楼2011-11-17 18:10:05
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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~
引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-17 18:06:25:
贴上你的连接体系及条件嘛，用哪家公司的酶？

takara的连接酶，16度过夜的
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许多奇迹，我们相信，才会实现……
4楼2011-11-17 18:34:36
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