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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

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专业: 代谢性疾病药物药理

[求助] 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建

如题，基因片段3.7Kb载体7Kb，Phage载体。
连接了几次都失败了。要么转化后没有长出克隆，要么长出来也是假阳性，小提质粒后酶切片段大小不对额

大片段不好连呢，求高手指教有妙招改进么？？

(转化采用的超级感受态细胞，42度30s)

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许多奇迹，我们相信，才会实现……

1楼 2011-11-17 14:21:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

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专业: 药物分析

★
wanhscn(金币+1): 不要过分相信那些技术支持,很多水平不行,不一定比我们实际做实验的人高! 2011-11-19 18:57:50

引用回帖:

8楼: Originally posted by srlee at 2011-11-17 20:31:40:
这个片段3.7Kb，载体7Kb连接应该是很好连接地，我们超过10kb的连接经常做也没有多大的问题，只是连接效率比小片段低一些。
至于连接要注意实验中的一些小细节问题：酶切割胶回收纯化是否干净？连接体系比例合不合 ...

表示完全不信，我连3点几K的时候也是一直连不上，咨询各大公司的技术支持，都说大于3K了效率直线下降，第一次听你说10K的都没多大问题。