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串联表达的问题
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| 想请教各位高手一个问题。我有两个酶基因需要表达，由于两个基因在染色体上的位置是相邻的，A800bp左右，B为1.1kb左右，A在B的上游，中间只间隔了19bp，并且已经验证了它们处于同一个操纵子，因此考虑将两个基因一起扩增后接入pET-28a，16度表达过夜，电泳检测发现只表达了A基因，为包涵体表达。后来我在B基因前面又插入了一段T7启动子序列，同样条件表达，电泳检测就只表达了B基因。这两个基因我分别接入pET-28a表达的话，均能成功表达，只是A表达多数为包涵体，B为可溶表达。这个问题纠结了我很长时间了，不知道该怎么解释。。还望各位高手帮我分析分析。先拜谢了。 |
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0624410024
金虫 (正式写手)
Begging for knowledge
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根据你的构建思路的话你还必须考虑到AB中间序列的影响等~~
10楼2011-11-18 11:09:15
啊Q精神
木虫 (小有名气)
- BioEPI: 5
- 应助: 19 (小学生)
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- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2011-11-17 08:39:54
【答案】应助回帖
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silicare(金币+5): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:15:42
silicare(金币+5): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:15:42
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你可以用Novagen的Duet系列载体。 这类载体有两个多克隆位点。你把两个基因分别转入到相应的位点，就可以同时表达这两个蛋白了。 pETDuet-1 is designed for the coexpression of two target genes. The vector encodes two multiple cloning sites (MCS), each of which is preceded by a T7 promoter, lac operator and ribosome binding site (rbs). |
3楼2011-11-17 09:37:46
4楼2011-11-17 10:47:12