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AMPK蛋白纯化问题讨论
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我最近在做AMPK的蛋白纯化，用的是原核表达，诱导表达的大部分目的蛋白都是包涵体，小部分是可溶的。我就利用这小部分的可溶蛋白过了两次His亲和层析柱，纯化出来的纯度大概在85%以上，可惜在浓缩的时候出现大量沉淀（用超滤管浓缩），剩余的可溶性蛋白只有0.2-0.3mg/ml，我看文献中说AMPK蛋白在大于1mg/ml时容易出现聚集，但是我的蛋白浓度总是停留在0.2-0.3mg/ml的浓度，不知道怎么回事。另外跑电泳发现沉淀基本上都是我的目的蛋白，杂蛋白其实都还在溶液中。大家帮忙分析下原因，有什么好办法。谢谢啦。 另外也做AMPK蛋白方面实验的战友可以联系我哦。相互交流经验嘛。 |
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 药物合成化学 | 【分子生物】EPI帖 | 蛋白质生物学 |
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3楼2011-11-15 21:01:49
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