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二次PCR产物弥散
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怎么都行
银虫
(小有名气)
应助: 21
(小学生)
金币: 591.8
散金: 45
帖子: 229
在线: 38.2小时
虫号: 1050090
注册: 2010-06-30
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能
[
求助
]
二次PCR产物弥散
第一轮PCR 产物微弱(上图),第二轮PCR用第一轮的产物做模板,无论模板稀释多少倍,怎么调整引物浓度和退火温度,结果都是如下图般——一片弥散带。求助高手这该怎么办呢?郁闷中。
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2011-11-10 14:11:15
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fwks3518
木虫
(正式写手)
应助: 28
(小学生)
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红花: 1
帖子: 368
在线: 146.1小时
虫号: 589028
注册: 2008-08-29
专业: 微生物遗传学
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
wanhscn(金币+3): 谢谢应助回帖! 2012-02-11 13:12:51
怎么都行(金币+10):
★★★
很有帮助 2012-02-11 18:59:47
这几天我也遇到二次PCR怎么扩增也不出的情况了,我查了一下网上的建议,总结为两种:
1 巢式PCR: 重新设计引物,比原先扩增的片段更长一些,然后再用原先的引物来扩增
2 不要再试图二次PCR了,如果觉得第一次PCR量少,那就平行多扩增几批,以此来积累PCR产物量。
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9楼
2012-02-11 09:30:19
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jeffzm
铁虫
(初入文坛)
应助: 0
(幼儿园)
金币: 164
帖子: 31
在线: 18.8小时
虫号: 1336237
注册: 2011-07-02
专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★
wanhscn(金币+2): 有可能! 2011-11-14 16:19:26
我觉得可能,也许,染胶的时候是不是有其它DNA污染,胶回收的时候回收的不纯。
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3楼
2011-11-14 15:12:19
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longrna
新虫
(正式写手)
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应助: 75
(初中生)
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红花: 8
帖子: 340
在线: 97.2小时
虫号: 1473815
注册: 2011-11-03
性别: GG
专业: 生物化学
遇到过同样的情况,还迷散的更厉害都有。。。。
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伟大航线....
4楼
2011-11-14 16:20:16
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shuangzi8761
银虫
(著名写手)
应助: 10
(幼儿园)
金币: 6472.4
散金: 798
红花: 8
帖子: 1549
在线: 309.3小时
虫号: 1449451
注册: 2011-10-18
性别: GG
专业: 植物病理学
【答案】应助回帖
占个位子 坐等答案 我也觉得奇怪 另外楼主为何要做二次PCR?
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5楼
2011-11-14 20:56:37
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