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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 二次PCR产物弥散
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怎么都行

银虫 (小有名气)

[求助] 二次PCR产物弥散

第一轮PCR 产物微弱（上图），第二轮PCR用第一轮的产物做模板，无论模板稀释多少倍，怎么调整引物浓度和退火温度，结果都是如下图般——一片弥散带。求助高手这该怎么办呢？郁闷中。
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1楼 2011-11-10 14:11:15
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fwks3518

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+3): 谢谢应助回帖！ 2012-02-11 13:12:51
怎么都行(金币+10): ★★★很有帮助 2012-02-11 18:59:47
这几天我也遇到二次PCR怎么扩增也不出的情况了，我查了一下网上的建议，总结为两种：
1  巢式PCR: 重新设计引物，比原先扩增的片段更长一些，然后再用原先的引物来扩增
2  不要再试图二次PCR了，如果觉得第一次PCR量少，那就平行多扩增几批，以此来积累PCR产物量。
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9楼2012-02-11 09:30:19
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jeffzm

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 有可能！ 2011-11-14 16:19:26
我觉得可能，也许，染胶的时候是不是有其它DNA污染，胶回收的时候回收的不纯。
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3楼2011-11-14 15:12:19
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longrna

新虫 (正式写手)
遇到过同样的情况，还迷散的更厉害都有。。。。
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伟大航线....
4楼2011-11-14 16:20:16
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

占个位子 坐等答案 我也觉得奇怪 另外楼主为何要做二次PCR?
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5楼2011-11-14 20:56:37
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