24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个博学EPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

woaiqiang

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 207.5
帖子: 12
在线: 5.9小时
虫号: 1035378
注册: 2010-06-04
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 单酶切连接的问题

我是用XbaI单酶切PMD-19载体，将我的两端都是XbaI酶切位点的pcr产物连接上去，但是做了很久，一直都是T载体自连，没有将我的目的基因连接进去，请问高手到底应该怎么处理，注意哪些方面，非常感谢，急啊！！！

回复此楼

» 猜你喜欢

交叉科学部支持青年基金，对三无青椒是个机会吗？已经有5人回复
国家基金申请书模板内插入图片不可调整大小? 已经有6人回复
招博士已经有6人回复
限项规定已经有8人回复
国家级人才课题组招收2026年入学博士已经有5人回复
Fe3O4@SiO2合成已经有6人回复
青年基金C终止已经有4人回复
青椒八年已不青，大家都被折磨成啥样了？已经有7人回复
26申博求博导推荐-遥感图像处理方向已经有4人回复
西南交通大学国家级人才团队2026年博士研究生招生（考核制）—机械、材料、力学方向已经有3人回复

1楼 2011-11-10 09:55:23

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

woaiqiang

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 207.5
帖子: 12
在线: 5.9小时
虫号: 1035378
注册: 2010-06-04
专业: 生物大分子结构与功能

1.我的连接体系是10微升，加1微升缓冲液，1微升T载体，7微升我的pcr产物，还有1微升的酶，T载体和pcr产物浓度比为1比7-10左右，都做过，可是挑出的单菌落都是自连了。
2.我的酶切位点是XbaI，两端加的保护碱基是GC，根据保护位点的要求加上去的
3.浓一点的话载体和产物浓度比大约是多少
请详细的说下你做过的单酶切可以么，想知道我的问题到底出在哪里，非常感谢！