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zyx335588

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[交流] T4连接问题 已有1人参与

我要合成两段60多个碱基寡核苷酸,混合変复性后产生某个酶的突出末端,然后通过T4连接酶连到单酶切的载体上。我看T4连接酶的说明书上都说是连接相邻核苷酸的磷酸基和羟基,但是为了防止载体的自连,我将酶切回收后的载体做了去磷酸化处理,那么我合成的这两段寡核苷酸是不是需要两端磷酸化处理呢?请高人解答。
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yandz680717

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
amisking(金币+2): 鼓励积极应助! 2011-11-09 19:59:41
找公司合成引物时可以特殊注明引物要求5‘端加磷酸根。不过价格贵一些。其实对载体不做去磷酸化处理,在连接体系中减少载体的量,加大外源基因片段的浓度也可以。我以前这样也能连上去
2楼2011-11-09 17:57:49
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