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popfirst

禁虫 (初入文坛)

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gayalynau

铁杆木虫 (著名写手)

估计MIX有影响,
2楼2011-11-04 15:24:56
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jipojiong

木虫 (小有名气)

不知道楼主的MARKER的大小? 个人认为MIX还是分装的酶影响应该不大。感觉做DGGE这个还是用点好酶吧。  
目的条带割胶回收纯化一下 , 紫外测一下浓度与纯度, 可以的话就能DGGE点样吧?
咦~飞碟!!
3楼2011-11-07 08:51:07
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

popfirst(金币+5): 2011-11-27 23:42:51
引用回帖:
1楼: Originally posted by popfirst at 2011-11-04 11:34:30:
如图,
打算是要扩增16S-V3区用于DGGE的,V3区PCR电泳图,跑的是温度梯度,由左至右是65-40℃(汗,本打算设50-65的,点错了)这是跑的效果图,用的是普通的已经混合好的mix。
问:为什么有这么明显的非特异性 ...

这对引物的退火温度应该在55左右 在这个前后试试
td pcr 能更多的扩增到不同的DNA,因为DGGE 是做多样性的方法,当然DNA 多样性越多 更好  所以一般都是DT pcr 跟 DGGE 结合的
3 可以说你做的挺好 上面那个一排很整齐的 是引物二聚体,可能原因是引物浓度过高或者退火温度偏低。引物,如果使用的是20um的 25ul体系加上0.2-0.25ui 就够了 。
再试试。
4楼2011-11-09 08:54:09
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