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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

[求助] 质粒怎么会提不出来'?

用试剂盒小提质粒时,从来没遇到过的现象:加完buffer2混匀,有些不清楚,以为正常,加完3混匀,不是明显的白色沉淀,而是整体的蛋白胶状物,离心12000rpm,10分钟,没离下东西,只是有透明丝状物
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

引用回帖:
10楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-07 16:47:18:
那有可能是你的液体培养基有问题,氨苄失效了,长起来的是杂菌。你在液体培养基里摇了多久才长起来?超过12小时才开始变浑浊的话肯定有问题了。
试试拿新加了氨苄的培养基来摇看看,如果是杂菌应该长不起来的。

板里也加一样的氨苄啊,能提出一点质粒来,我还是在转化一下吧
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11楼2011-11-09 13:10:29
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王玉民

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

junxiao0320(金币+1): 2011-11-04 08:21:29
junxiao0320(金币+1): 2011-11-04 08:21:48
junxiao0320(金币+1): 2011-11-05 18:48:01
试剂盒用久了吧,那个buffer2是氢氧化钠和SDS,开口时间长了与空气中的二氧化碳反应了,也可能是3有问题了。换换试剂盒试试。要不就是菌不对。
心晴
2楼2011-11-03 21:33:53
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gao-feng

铁杆木虫 (著名写手)

疯子

细菌本身的问题吧
开开心心做科研,踏踏实实做好人。
3楼2011-11-03 22:07:21
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longrna

新虫 (正式写手)

加完Buffer 2不澄清可能有以下原因,
1.buffer 2失效,但一般plasmid kit 保持期有1年,除非你kit太久,否则此可能性不大。
2.菌的问题。可能你养的菌有杂菌也会出现buffer 2不澄清的情况。
(另外,你buffer 1 2 3加时没搞错吧?

你可以同时做一个确定没问题的菌(即我们常说的对照)来排除是kit还是你菌的问题。
伟大航线....
4楼2011-11-04 09:28:04
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