24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (2134)
>虫友互识 (349)
>基金申请 (70)
>休闲灌水 (65)
>论文投稿 (52)
>博后之家 (35)
>文献求助 (31)
>导师招生 (27)
>硕博家园 (20)
>考博 (10)
>教师之家 (9)
>考研 (9)
>药学 (8)
>公派出国 (7)
>论文道贺祈福 (3)
>找工作 (3)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

炎黄逍遥

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3.5
帖子: 5
在线: 1.3小时
虫号: 1020544

[交流] CTAB 基因提取方法的问题

最近学习提取昆虫基因组（用的是蛴螬），采用CATB法，从文献上找的CTAB提取液配方，如下
0.1M Tris-HCl/ 0.02M EDTA/ 1.4M NaCl/ 0.2% β-巯基乙醇/ 0.05M CTAB
液氮研磨，苯酚氯仿抽提，冷异丙醇沉淀
头一次做使用的华北大黑鳃金龟和铜绿丽金龟幼虫，提取效果挺好，做PCR条带也很清晰，可是过了一周之后又做了一次（换做暗黑鳃金龟和黄褐丽金龟幼虫），虽然提取效果也不错，但是PCR却再也P不出东西来了

，四种昆虫基因组提取结果如图所示（前两个能PCR出条带，后两个P不出来）。
这个问题是CTAB提取的问题么？PCR应该不会出现问题，引物设计和程序一类都没问题，我觉得问题可能会出现在提取液上面。
CTAB配制完后我一直都是室温保存，因为放4℃感觉是完全析出。。这个提取液需要现用现配吗？使用之前不温浴溶解对提取影响大吗？确实第二次做的时候没有温浴，因为我看只有少量白色絮状析出，而且研磨之后要65℃水浴1个小时，所以觉得提前温浴没有什么必要吧。。。
各位大侠能看出来这是哪里出现了问题吗？或是有哪位同学以前也出现过这种问题？是如何解决的啊？

从左到右分别是大黑，铜绿，暗黑，黄褐前两个P出了结果，后两个P不出来了

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

环境样品地下水中细菌总DNA的提取方法已经有23人回复
动植物样品的采集及DNA样品的提取(ZT) 已经有10人回复
真菌基因组DAN提取图片，求高人指点已经有20人回复
求助土壤基因组 PCR 扩增问题已经有30人回复
在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下,提DNA 的高手请进！！！已经有15人回复
CTAB提取细菌DNA 已经有15人回复
【原创】原创之六：环境样品总DNA的提取与纯化【已搜索无重复】已经有178人回复
【求助/交流】CTAB 法提取DNA，克隆基因全长？已经有7人回复
【求助/交流】CTAB法提取了dna，帮我看看图片，帮忙提点改进方法已经有20人回复
【求助/交流】急！！CTAB提取液4度保存，有白色絮状物，可以用来直接提取植物DNA吗？已经有4人回复
【求助/交流】细菌基因组DNA的提取法（CTAB/NaCl 法）,提取的DNA是否为细菌总DNA? 非� 已经有11人回复
【求助/交流】植物基因组DNA提取（CTAB法）已经有7人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-11-02 15:48:12

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Iloveshuai

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 368.5
帖子: 18
在线: 13.9小时
虫号: 1936227

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

用CTAB的大多是来提植物的呢而且我们P的时候都稀释过的

赞一下

回复此楼

11楼2012-11-04 13:10:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 11 个回答

rollandyoung

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 768.6
帖子: 272
在线: 72小时
虫号: 916377

★ ★ ★ ★
炎黄逍遥(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2011-11-02 20:58:32

1.我们用ctab提取dna的时候都不会现用现配。个人感觉放置个把月没问题。
2.提前水浴是因为温度较低的情况下ctab会有少量无法溶解，水浴是为了使其溶解。
3.pcr没有结果可以看一下是不是乙醇洗沉淀的时候没有挥发干净，其实有的时候什么步骤都没变就是做不出来，过一段时间又出来了，做分生就是这样，有的时候很难说出原因。

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2011-11-02 19:48:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖