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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多个亚基蛋白 ORF串联表达
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mYang88

新虫 (初入文坛)

[求助] 多个亚基蛋白 ORF串联表达

请问：4个亚基的蛋白  ，4个ORF可否串联在一起 构建一个重组子表达

如果可以，那么
（1）ORF之间是否需要添加其他序列
（2）4个ORF共用一个启动子会不会影响表达效率
（3）每个ORF都要保留有完整的其实种子密码子么
（4）构建重组子时应注意哪些问题

不胜感激！
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1楼 2011-11-01 10:35:45
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lwq652 at 2011-11-11 23:25:01
把stop codon 去掉是可以的，这是融合表达，GFP是用来做报告基因的，但是我感觉楼主需要的是翻译的蛋白还能组装，所以建议如果做融合表达的话在两蛋白之间加一柔性linker
当然也可以做单promoter的表达，一个promo ...

我想请教一下LINKER的设计和选择问题：
何时选取刚性的LINKER?何时选柔性的？

一般通过什么办法添加LINKER？？
报道的OVERLAP PCR法似乎有许多反应效率不高的问题
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8楼2013-07-11 00:13:42
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mYang88

新虫 (初入文坛)
纠正。。。。（3）每个ORF是否需要保留完整的终止密码子
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2楼2011-11-01 10:36:51
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2, MolEPI+1): 鼓励积极应助！ 2011-11-01 19:53:45
只做过2个ORF的。。。
（3）终止密码子只保留最后一个ORF的，前面3个的去掉，不然后面的没法翻译。
（4）最需要注意的就是阅读框，因为克隆过程中会引入多余的序列，所以设计时就必须考虑阅读框，避免密码突变。
做得不多，只能说这么点了，等高人吧。
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3楼2011-11-01 17:16:17
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mYang88

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-01 17:16:17:
只做过2个ORF的。。。
（3）终止密码子只保留最后一个ORF的，前面3个的去掉，不然后面的没法翻译。
（4）最需要注意的就是阅读框，因为克隆过程中会引入多余的序列，所以设计时就必须考虑阅读框，避免密码突变。 ...

可是如果中间的终止密码子去掉翻译出来不就成了一条肽链么？
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4楼2011-11-01 17:59:28
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