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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多个亚基蛋白 ORF串联表达
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mYang88

新虫 (初入文坛)

[求助] 多个亚基蛋白 ORF串联表达

请问：4个亚基的蛋白  ，4个ORF可否串联在一起 构建一个重组子表达

如果可以，那么
（1）ORF之间是否需要添加其他序列
（2）4个ORF共用一个启动子会不会影响表达效率
（3）每个ORF都要保留有完整的其实种子密码子么
（4）构建重组子时应注意哪些问题

不胜感激！
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1楼 2011-11-01 10:35:45
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-01 17:16:17
只做过2个ORF的。。。
（3）终止密码子只保留最后一个ORF的，前面3个的去掉，不然后面的没法翻译。
（4）最需要注意的就是阅读框，因为克隆过程中会引入多余的序列，所以设计时就必须考虑阅读框，避免密码突变。
...

第一个问题：我也要做两个基因的串联，你说的只留最后一个orf的终止密码子，你是用的“启动子+基因1+基因2+终止子”这种模式，还是第二种“启动子1+基因1+终止子1+启动子2+基因2+终止子2”这种吗？
第二个问题：原核表达一般不都是只需要成熟肽序列转入表达载体进行表达吗，我要做的蛋白ai包含两个亚基，a和b,我能不能直接把两个亚基的成熟肽序列转入表达载体进行表达，两个亚基的串联顺序如何，哪种串联方式，要不要加多余的序列，设计酶切位点引物的时候要不要考虑这个问题，我用的表达载体是pet32a



跪谢大神
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
10楼2015-08-19 16:33:21
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mYang88

新虫 (初入文坛)
纠正。。。。（3）每个ORF是否需要保留完整的终止密码子
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2楼2011-11-01 10:36:51
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2, MolEPI+1): 鼓励积极应助！ 2011-11-01 19:53:45
只做过2个ORF的。。。
（3）终止密码子只保留最后一个ORF的，前面3个的去掉，不然后面的没法翻译。
（4）最需要注意的就是阅读框，因为克隆过程中会引入多余的序列，所以设计时就必须考虑阅读框，避免密码突变。
做得不多，只能说这么点了，等高人吧。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-11-01 17:16:17
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mYang88

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-01 17:16:17:
只做过2个ORF的。。。
（3）终止密码子只保留最后一个ORF的，前面3个的去掉，不然后面的没法翻译。
（4）最需要注意的就是阅读框，因为克隆过程中会引入多余的序列，所以设计时就必须考虑阅读框，避免密码突变。 ...

可是如果中间的终止密码子去掉翻译出来不就成了一条肽链么？
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4楼2011-11-01 17:59:28
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