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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于原核表达中，IPTG,KAN等的配制和最终工作浓度问题！！！
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丙氨酸密码子

新虫 (小有名气)

[求助] 关于原核表达中，IPTG,KAN等的配制和最终工作浓度问题！！！

下一步要做原核表达了，
今天就特意请教师姐，那些需要的试剂配制以及使用时的工作浓度问题。
结果，我还是迷茫啊，
我打算配制10mg/ml的kan，使用时的工作浓度为15ug/ml。
师姐们用的工作浓度是15mM，并且说15mM=15ug/ml
我凌乱了，，，
请各位有经验的大侠指教一下。
这些单位到底是怎么换算的？
谢谢了。
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1楼 2011-10-25 10:26:40
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丙氨酸密码子

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-10-25 10:55:56:
15mM=15ug/ml 你们用的卡那霉素分子量是484.34？

我也不知道啊？按照师姐的那种说法，单位mM就是=ug/ml ，，，我也很凌乱啊，，， 难道之后添加的IPTG诱导 也这样算着 添加吗？
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3楼2011-10-25 11:04:18
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丙氨酸密码子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yeshui at 2011-10-25 16:33:36:
你师姐错了，这两个单位怎么能画等号呢

是啊。我表达疑惑，师姐表现得有点不耐烦了，我也就没问了，， 那到底怎么换算啊，， 怎么根据终浓度和配置的浓度 来确定加的量啊？
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6楼2011-10-25 18:12:34
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丙氨酸密码子

新虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by yeshui at 2011-10-26 17:37:11:
我们用的是卡那霉素硫酸盐，分子量好像是528.28，我记不大清了。15mM意思是15mM/L,也就是15*528.28mg/L，也就是15*528.28ug/ml

谢谢了，我这几天在配置试剂 和 双酶切。我没理会师姐的说法，我自己算的。
可能还是自己不够自信吧，总觉得师兄师姐们就是对的，其实 有些东西，可能他们也不是很清楚，就一直那么糊涂下来的。 而偏偏 我是比较 较真的人， 要 前前后后弄清楚了  才放心添加试剂。
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12楼2011-10-30 13:39:30
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丙氨酸密码子

新虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by 饼哥 at 2011-10-27 11:27:02:
楼主你好，我前段时间一直在做原核表达，效果挺好的，告诉你我的用量。我将卡那霉素配成30㎎/ml，用时按培养液体积的千分之一添加。IPTG配成200㎎/ml，用时每ml培养液里加入1.2-1.5μL的IPTG，令其终浓度为1mM左右 ...

嗯，谢谢你的经验。我kan配得是 20mg/ml 的，然后IPTG是 50mg/ml的。  我都算清楚，到时候 诱导 我也知道应该加多少量的。 谢谢你们了！
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13楼2011-10-30 13:41:09
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丙氨酸密码子

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by lingorling at 2011-10-26 17:20:10:
就是单位换算，自己可以静下心来慢慢的换算一下，相信自己，你一定会理清头绪的

嗯。理清楚啦，，
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14楼2011-10-30 13:42:48
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