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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 过带his标签的蛋白时镍柱上样后颜色变棕色是怎么回事
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wight3

铜虫 (初入文坛)

[求助] 过带his标签的蛋白时镍柱上样后颜色变棕色是怎么回事 已有1人参与

过带his标签的蛋白时镍柱上样后颜色变棕色是怎么回事
柱子的颜色如下面附图
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1楼 2011-10-22 12:05:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

陇西才神

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wizardfan: 金币+5, 首贴奖励，以后多发帖交流 2012-11-28 07:07:45
你给的图片貌似是一根分子筛，你所谓的变成棕色是在Ni亲和柱上还是在分子筛上才变成棕色？如果是Ni亲和beads呈棕色，按我的经验，应该是你buffer中含有DTT，b-ME等还原剂，将二价Ni离子还原所致。如果是在分子筛上变色，应该是你的样品中有显色杂质，至于你的蛋白是黄色，首先考虑一下是不是结合核酸，这是最可能的因素。另外，我并不觉得蛋白结合色素分子跟发好文章有啥联系。
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16楼2012-11-28 03:55:46
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普通回帖

doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

应该是样品本身所带颜色造成的
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2楼2011-10-22 12:20:33
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-10-22 18:43:37
图怎么这么难看？
怎么看都不像是柱子？

确定不是被氧化啥的，确定能重复出来，那你就发了。。。
有的蛋白表达出来是带着一个色素小分子的，如果真是酱紫，等着发好文章吧
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小木虫之有关部门负责人
3楼2011-10-22 12:21:17
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-10-24 11:48:07
裂解液中含有DTT等还原试剂，导致NI被还原
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4楼2011-10-22 12:21:59
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li1977li

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by scelab at 2011-10-22 12:21:17:
图怎么这么难看？
怎么看都不像是柱子？

确定不是被氧化啥的，确定能重复出来，那你就发了。。。
有的蛋白表达出来是带着一个色素小分子的，如果真是酱紫，等着发好文章吧

我表达了一个蛋白也是带颜色，是黄色的，请问这也能发好文章？望赐教。谢谢！
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5楼2011-10-22 15:29:03
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by li1977li at 2011-10-22 15:29:03:
我表达了一个蛋白也是带颜色，是黄色的，请问这也能发好文章？望赐教。谢谢！

我是猜着玩的
黄色的很常见，黄素蛋白嘛
关键是蛋白的功能了~~~没人报道过的酶促反应，应该可以发到4分左右的杂志
还有一点，运气成分啊，如果你做的相当不错，jbc都是有可能的
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小木虫之有关部门负责人
6楼2011-10-22 16:04:09
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wight3

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by doublehelix at 2011-10-22 12:20:33:
应该是样品本身所带颜色造成的

样品本身是没有颜色的，上样前也已经经过G25除盐了的，而且最终用500mM咪唑能够还原柱子颜色
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7楼2011-10-23 19:18:41
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wight3

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xhjggl at 2011-10-22 12:21:59:
裂解液中含有DTT等还原试剂，导致NI被还原

上样前也已经经过G25除盐了的，而且最终用500mM咪唑能够还原柱子颜色
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8楼2011-10-23 19:19:23
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wight3

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by scelab at 2011-10-22 12:21:17:
图怎么这么难看？
怎么看都不像是柱子？

确定不是被氧化啥的，确定能重复出来，那你就发了。。。
有的蛋白表达出来是带着一个色素小分子的，如果真是酱紫，等着发好文章吧

后面设备比较多，照的图比较大，就只截了下柱子的中间部分，这个样品是已经经过酶切了的，500咪唑也能够还原柱子颜色，明天再重复一次，看看是不是还会变颜色
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9楼2011-10-23 19:23:31
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
里面不会有还原剂吧，DTT或者巯基乙醇什么的。不过看楼主的回答不像是有这些杂质，那我觉得很有可能这个蛋白本身具有还原作用，不会是电子传递链的关键蛋白或者是什么还原酶吧？但是洗脱之后又能复原，不太明白。坐等高人解答。
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10楼2011-12-26 07:25:30
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