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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ssDNA形成dsDNA
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我很囧

铁虫 (小有名气)

[求助] ssDNA形成dsDNA

最近试验中，单链DNA（标记FAM）与互补链形成dsDNA后荧光值升高了一倍左右，请问为何这样？不知道是否形成了所要的双链。
怎样条件：如反应多久或怎么操作下才能使两条互补单链形成双链较完全？如何简单验证双链的形成？请高手指点。
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1楼 2011-10-20 08:47:10
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呼呼哈哈嘿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 更深的蓝 at 2011-11-04 15:44:55
你就这样做，将FAM标记的ssDNA和完全互补的ssDNA等比例混合，烧壶开水，倒到烧杯，将装有DNA的EP管放到浮漂上丢到烧杯中，让其缓慢冷却到室温，这样就杂交效果会很好。验证的话，可以用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，相 ...

请问带fam不需要染胶那采用什么光源呢？用凝胶成像的紫外吗

发自小木虫IOS客户端
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11楼2017-07-18 15:01:16
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更深的蓝

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good！鼓励应助！ 2011-10-22 21:25:13
我很囧(金币+2): 2011-10-24 08:19:31
至于有没有形成双链的DNA，可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳验证。一般情况下，完全互补的ssDNA等比例混合后，在高于Tm值的温度下孵育几分钟，然后缓慢冷却到室温。
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低调务实！
2楼2011-10-22 19:50:34
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likeyangff

木虫 (初入文坛)
高于TM温度，不就解链的吗？
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3楼2011-10-24 20:35:00
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我很囧

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by likeyangff at 2011-10-24 20:35:00:
高于TM温度，不就解链的吗？

所以叫退火啊。呵呵
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4楼2011-10-24 20:48:50
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