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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by HarveyWang at 2011-10-18 16:00:24:
很简单。。

1)在进行上述操作之前,将土壤样品在 0.9% NaCl 灭菌水中混匀2-5 min(1g 土壤/5-10mL),然后高速离心10000 rpm X 5min,使土壤颗粒和菌体或菌丝沉淀。

2)倒掉离心上清!将沉淀用1-3 mL 0.9% ...

您好!
目前我看到的关于这方面土壤DNA 提取 腐植酸去除 是个很大的难题 你这个办法不知道你亲自用过没? 另外,如果分离菌体跟腐殖质效果好的话,那一般做土壤DNA的 一般是做微生物多样性的 这样的方法损失率该有多大呢?
5楼2011-10-18 18:11:55
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HarveyWang

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海外行者

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
wolfebst(金币+3): 鼓励 2011-10-18 16:28:50
wolfebst(金币+3): 鼓励 2011-10-18 16:28:52
lilylee61(金币+1): 你提供的方法我有待验证,希望有用。多谢你的指教。 2011-10-19 19:54:39
很简单。。

1)在进行上述操作之前,将土壤样品在 0.9% NaCl 灭菌水中混匀2-5 min(1g 土壤/5-10mL),然后高速离心10000 rpm X 5min,使土壤颗粒和菌体或菌丝沉淀。

2)倒掉离心上清!将沉淀用1-3 mL 0.9% NaCl 灭菌水重悬,冰浴中静置1-2分钟使土壤颗粒自然沉淀。

3)取浑浊的上层液1-2 mL,高速离心10000 rpm X 5-10min。倒掉离心上清!沉淀再按比例加入DNA提取缓冲液和石英砂等,进行提取工作(这个比例得根据你自己的土壤样品摸索下咯)。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2011-10-18 16:00:24
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匿名

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3楼2011-10-18 16:11:22
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HarveyWang

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海外行者


zhang8826857(金币+1): 鼓励一下^_^ 2011-10-18 17:20:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by lilylee61 at 2011-10-18 16:11:22:
0.9% NaCl 灭菌水 是用于清除腐殖质的吗?

用于悬浮和沉淀菌体。。。。腐殖质的大部分都可以选择性地在上清(可溶性部分)或与土壤共沉与沉淀中(残枝败叶)。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2011-10-18 16:37:36
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