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lijunqing525金虫 (正式写手)
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[求助]
包涵体蛋白纯化
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| 大肠杆菌中包涵体已经在含8M尿素的tris-hcl中裂解了，后面怎样除去高浓度的尿素，用什么溶液？咋样纯化得出我所需的目的蛋白？望高手指教。 |
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【答案】应助回帖
lijunqing525(金币+30, 博学EPI+1): 10 2011-10-17 18:52:32
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可以先进行蛋白浓缩处理，如果你觉得必要，但我个人在上柱之前从不浓缩，干吗要多一个步骤呢，层析本来就会有浓缩的作用。 2. 蛋白浓缩方法在实验室做还是PEG比较简单，只需要一个透析袋就够了。但我个人喜欢超虑，不好意思。不建议用(NH4)2SO4沉淀或丙酮沉淀。 3. 不管用哪种方法浓缩，如果浓度一上去蛋白就大量沉淀，那对不起请重新优化你的复性方案。但也请避免过量浓缩蛋白，如果一个蛋白在2mg/ml以下是稳定的，那就千万不要浓缩到3mg/ml。 4. 8M尿素一般情况下是不会影响你的挂柱的。 5. 用PEG干粉包埋透析袋的方法进行蛋白浓缩的时候，所有的小分子（只要分子量小于透析袋截留分子量的）都可以自由进出。一般实验室我见过的用10KD左右的透析袋比较多，我想你应该也是用这种的，所以请不要用PEG6000的干粉了，你不是在做浓缩，你是在做PEG沉淀，因为你的PEG都跑透析袋里去了。 |
2楼2011-10-17 15:35:13