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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母表达
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pidou213

木虫 (正式写手)

[求助] 毕赤酵母表达

毕赤酵母表达中
1\ 要求开始表达之前的起始浓度是OD600=1.0.请问这个浓度对其表达的影响到底有多大?
2\在我表达过程中，我发现酵母的浓度仅需要24h就已经很浓很浓了，是否还需要稀释呢？
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见得多爱的多
1楼 2011-10-14 12:59:41
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wanhscn
2楼2011-10-15 00:14:56
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ruth_3912834

铜虫 (小有名气)
路过，学习
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3楼2011-10-15 09:00:57
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黎明星01

新虫 (初入文坛)
飘过，不过顶一下！
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4楼2011-10-15 10:15:15
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pidou213

木虫 (正式写手)
貌似没有人会哦
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见得多爱的多
5楼2011-10-19 12:10:37
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pidou213

木虫 (正式写手)
★
wanhscn(金币+1): 如果没人发，金币可申请返还！ 2011-11-08 09:02:41
没有人回复，让我这金币如何发啊???
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见得多爱的多
6楼2011-10-30 00:37:33
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★
pidou213(金币+3): 2011-10-31 12:10:01
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-11-01 17:44:05
这个应该1.0左右即可，即酵母繁殖到一定程度，有一定数量，不至于添加甲醇后表达蛋白而细胞不生在繁殖了。
24h后为什么需要稀释，感觉没必要。
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7楼2011-10-30 02:10:30
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wt3532 at 2011-10-30 02:10:30:
这个应该1.0左右即可，即酵母繁殖到一定程度，有一定数量，不至于添加甲醇后表达蛋白而细胞不生在繁殖了。
24h后为什么需要稀释，感觉没必要。

那如果 超过了指数生长期（OD600=2-6），此时的酵母菌还可以稀释到OD1.0用来做诱导表达吗？
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见得多爱的多
8楼2011-10-31 12:09:54
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good！一起奖励！ 2011-11-01 17:44:51
pidou213(金币+2): 劳烦再回答一下 2011-11-04 17:12:10
引用回帖:
8楼: Originally posted by pidou213 at 2011-10-31 12:09:54:
那如果 超过了指数生长期（OD600=2-6），此时的酵母菌还可以稀释到OD1.0用来做诱导表达吗？

当然不能稀释啦！！你稀释之后虽然OD值是变回来了，但是里面的菌所处的生长时期又不会变！！

或者你用培养基稀释到更小的OD，再培养到所需的OD，这种方法或许还可以。
但是最好还是重新培养吧。重新接种也不是很麻烦啊，只是下次要注意培养时间咯。。
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9楼2011-11-01 14:25:12
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jingdejun at 2011-11-01 14:25:12:
当然不能稀释啦！！你稀释之后虽然OD值是变回来了，但是里面的菌所处的生长时期又不会变！！

或者你用培养基稀释到更小的OD，再培养到所需的OD，这种方法或许还可以。
但是最好还是重新培养吧。重新接种也不 ...

请问你们用什么方法稀释到OD=1.0呢 毕竟感觉操作起来 好麻烦啊  并且还容意污染
所以想请叫 你们是怎么做的呢 ？、能详细描述一下吗？ 谢谢啊
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见得多爱的多
10楼2011-11-04 17:13:27
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