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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

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[求助] 构建好的质粒如何防止丢失

好不容易构建好一个重组质粒，在大肠杆菌中也能表达，但出现一个问题质粒会不会随菌体的传代而丢失呢，因为想应用于工业发酵，质粒丢失就不能表达相应蛋白了，那么如何防止传代过程中质粒的丢失呢，望高手指点。谢谢！

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1楼 2011-10-14 10:02:29

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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

暗夜懒猫(金币+2): 2011-10-17 08:09:08

1.不管加不加抗生素，传代次数多了质粒拷贝数都会减少，蛋白表达水平都会下降
2.保存质粒是最安全保险的方法，每次用时可以重新转化
3.由于感受态制做时每一个菌所处的生理周期不同，所以转化后各个菌的表达水平大致可分为5个水平层次
4.由于第三个原因，所以发酵用的种子最好要经过筛选
5.筛选出好的单菌落要尽快做成种子库
6.在做种子库时要尽量减少传代次数